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小鼠MCMV先天感染模型的构建及神经系统感染状况的观察

作　者: 杜小弋
导　师: 方峰
学　校: 华中科技大学
专　业: 儿科学
关键词: 巨细胞病毒动物模型先天感染神经系统脑组织
分类号: R-332
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的建立小鼠巨细胞病毒(MCMV)先天感染模型,并观察其脑组织的病理变化及感染状况。方法1)MCMV毒株制备及感染性滴度的测定:剖宫取出孕中晚期BALB/c胎鼠,制备鼠胚成纤维细胞(MEF);扩增MCMV RM461病毒株,用蚀斑法测定病毒滴度;稀释至造模所需浓度(1×103 PFU/μL)备用;2)MCMV先天感染模型的构建:取孕11～13.5d(E11～13.5d)的BALB/c鼠,麻醉后逐个孕囊行羊膜腔内病毒接种(RM461病毒悬液1μL,病毒量1×103PFU),小心复位后关腹;对照组羊膜腔内注射DMEM培养液1μL。单独饲养5d后处死孕鼠,剖宫取出胎鼠,麻醉处死,取胎鼠脑组织制作冰冻切片;3)胎脑组织病理改变及病毒抗原检测:脑组织切片常规HE染色,光镜下观察病理学变化;采用免疫酶组化及免疫荧光法检测脑组织中的MCMV早期抗原。结果1)成功扩增MCMV RM461毒株,测得感染性病毒滴度为3.27×107PFU/mL;2)成功构建MCMV先天感染模型。感染组和对照组的胎鼠存活率分别为71.9%和76.7%。与对照组相比,羊膜腔内接种MCMV病毒对胎鼠存活率、吸收胎率、死胎率及胎鼠头部重量无明显影响,但可致胎鼠体重降低;3)脑组织病理学变化:对照组脑组织未见有结构异常;感染组出现脑室、脑沟回发育不良,神经细胞水肿,脑室区、脑室下区和大脑皮质区主要有淋巴细胞、单核细胞等炎症细胞浸润;4)病毒抗原检测:在宫内感染组,免疫酶学组化法发现脑室区、脑室管膜下区、大脑皮质和海马区可见病毒感染细胞;免疫荧光观察到的主要感染部位与免疫酶组化一致。结论通过羊膜腔内注射MCMV RM461病毒悬液成功建立MCMV先天感染模型,为研究MCMV先天感染致脑发育异常机制提供合适的整体研究模型。

小鼠MCMV先天感染模型的构建及神经系统感染状况的观察

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