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目的:观察补肾活血方及其补肾、活血组分对控制性超促排卵(Controlled Ovarian Hyperstimulation,COH)小鼠胚泡着床期基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9,基质金属蛋白酶抑制因子-3、转化生长因子-β1及整合素αvβ3的影响,探讨补肾活血方及其拆方对胚胎植入阶段的作用机制,明确拆方两组分间是否存在选择或协同作用;为补肾、活血法治疗不孕症提供现代科学依据。方法:将小鼠随机分为正常组、模型组、补肾安胎组、补肾组和活血组。正常组为下午5:00腹腔注射生理盐水0.1ml,48小时后腹腔注射生理盐水0.1ml后按雌雄比例1～2:1当晚合笼,模型组和中药组于下午5:00腹腔注射PMSG 10IU,48小时后腹腔注射HCG 10IU,于注射HCG当晚按雌雄比例1～2:1合笼。次日早晨7:00～8:00检查雌鼠阴道,发现阴栓者计为妊娠第1天(Pd1,pregnant day 1)。正常组和模型组于注射PMSG日起每日上午8时灌服双蒸水0.3ml,中药组灌服相应中药0.3ml。于妊娠第5、6、7天收集小鼠子宫标本。观察小鼠Pd5、Pd6、Pd7着床位点数;采用实时定量RT-PCR方法测定Pd5、Pd6、Pd7子宫内膜MMP-2、MMP-9、TIMP-3、TGF-β1及整合素αvβ3 mRNA的表达,免疫组织化学法测定同时期子宫内膜MMP-2、MMP-9、TIMP-3、TGF-β1及整合素αvβ3蛋白的表达。结果:1、各组小鼠着床位点数比较模型组及各中药治疗组的着床位点数均显著高于正常组。中药治疗组高于模型组,但无统计学差异。中药治疗组中,补肾安胎组高于其余两组,但无统计学差异。2、实时定量RT-PCR结果比较在MMP-2 mRNA的表达上,与正常组比较,Pd5、6模型组显著升高(p<0.05),但是,Pd7中模型组显著低于正常组(p<0.01);与模型组比较,中药治疗组中都不同程度上高于模型组,以活血组更为明显(p<0.05)。在MMP-9 mRNA的表达上,从Pd5、6、7正常组逐渐升高,而模型组在Pd5呈现先下降后上升的趋势,与模型组比较,各中药治疗组在Pd7均显著增加(p<0.05)。在TIMP-3mRNA的表达上,从Pd5到Pd7逐渐升高,而模型组则未表现出升高的趋势,与正常组比较,模型组在Pd5、6、7均有显著性差别(p<0.05);各中药表现出与正常组相同的趋势,但是,在Pd7各中药组显著高于模型组(p<0.05)。在TGF-β1mRNA的表达上,在Pd5、6,与正常组比较,模型组显著增加(p<0.05),各中药治疗组在Pd5、7接近正常组,其中活血组与正常组的表达趋势完全一致。在整合素αvβ3 mRNA的表达上,在Pd5、6、7表达基本持平,与正常组比较,模型组在Pd5、6显著增高(p<0.05),而在Pd7却显著下降(p<0.05);与模型组比较,各中药组出现不同的表达趋势。3、免疫组化结果比较MMP-2,MMP-9,TIMP-3蛋白表达在着床期间子宫内膜腺上皮和腔上皮细胞中,随着蜕膜化发展,表达于蜕膜化间质细胞中;TGF-β1在Pd5表达在初级蜕膜带,随着蜕膜化发展,在次级蜕膜带及细胞外基质表达,在腔上皮和腺上皮也有弱阳性表达;整合素αvβ3在腔上皮和腺上皮呈阳性表达,蜕膜化间质细胞中呈弱阳性表达。5组小鼠表达空间分布无明显差异。正常组基质紧密,腺体丰富,模型组基质稀疏,腺体偏少;中药组腺体和间质分布程度介于两者之间。结论:补肾安胎方及补肾、活血组分能够改善超促排卵小鼠的着床位点数,并使MMP-2,MMP-9,TIMP-3的mRNA趋于正常,在TGF-β1和整合素αvβ3上,并没有显出明显的差别。补肾、活血组分在改善胚泡着床中具有协同作用,活血中药没有表现出负面的影响。
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