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几种体外抗氧化检测方法的评价研究

作　者: 张明
导　师: 李发荣
学　校: 陕西师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 抗氧化方法评价 相关性分析 自由基
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 752次
引　用: 8次
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内容摘要


体外抗氧化是抗氧化物质评价的重要方法,由于体外抗氧化检测体系简单,操作迅速,成本低,使得体外抗氧化评价方法在食品、药品等抗氧化效应的评价方面使用日益广泛,但是由于体外抗氧化检测体系大多为纯化学反应体系,不同检测反应体系中所使用的自由基种类、自由基产生方法、自由基损伤的底物种类、损伤检测原理等各不相同,导致不同的抗氧化检测方法所获得的结果相关性较差,不同抗氧化检测方法对同一种抗氧化剂进行评价可以获得不同的结果,甚至相互矛盾,利用不同抗氧化检测方法对不同抗氧化剂进行评价,对抗氧化剂抗氧化能力强弱的判定往往差别较大,使得研究者难以给出确切的结论。抗氧化效应的检测目的在于筛选可以用于清除人体内自由基的抗氧化物质,用于疾病治疗或者预防的目的,所以体外的抗氧化检测方法需要尽可能吻合体内的状况,才有可能真实的评价抗氧化物质的抗氧化效果,很多体外抗氧化方法采用的是纯化学反应体系,所用的自由基种类和生理自由基不一致,检测自由基损伤的分子种类与生物体内的损伤物质也不对应,使得体外检测所得的抗氧化物质在体实验往往效果不明显。我们以常见的四种抗氧化剂为试验样品,利用不同的抗氧化检测方法对其抗氧化效果进行评估,根据评估的结果进行相关性分析,将相关性高的方法进行归类,并依据其反应体系的特点对其进行初步分析评价,为研究者选择合适的体外抗氧化方法提供科学依据。通过对实验结果的分析发现：第一,结晶紫法、2-脱氧-D-核糖法、TBA法,这位三种方法之间相关性较高,在抗氧化物质的能力检测中,这三种方法应该一起选择,得到的结果可能代表抗氧化剂对羟基自由基的清除能力或者脂质的保护能力。第二,肝脏线粒体脂质过氧化检测分别与结晶紫法、TBA法、抑制蛋白质羰基化检测、双氧水诱导红细胞溶血法有很好的结果相关性,是更适合生物体内情况的抗氧化检测方法,可以用于检测物质对生物膜系统的保护能力,或者对于脂质,蛋白质的保护能力。第三,清除DPPH自由基法、亚硝基R盐钴离子褪色法、邻苯三酚自氧化法,这3种方法也是有较高的结果相关性的,可以用来检测抗氧化剂对多数自由基的清除能力。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-7
第1章 引言  7-20
  1 自由基及其损伤效应  7-9
    1.1 自由基的产生  7-8
    1.2 自由基的种类  8
    1.3 自由基对人体的危害  8-9
  2 自由基的清除方法  9-10
  3 体外抗氧化物质的筛选方法  10-16
    3.1 纯化学类检测方法  11-13
    3.2 生物组织类检测方法  13-16
  4 体外抗氧化活性评价方法的不足  16-18
  5 本研究的内容目的和意义  18-20
    5.1 研究内容  18
    5.2 研究的目的和意义  18-20
第2章 实验材料和方法及结果  20-41
  2.1 主要材料,试剂与仪器  20-21
  2.2 主要考察的方法  21-27
    2.2.1 清除DPPH自由基的方法  21
    2.2.2 结晶紫法  21-22
    2.2.3 亚硝基R盐-Co~(2+)褪色法  22
    2.2.4 2-脱氧-D-核糖法  22-23
    2.2.5 邻苯三酚(焦性没食子酸)的自氧化法  23-24
    2.2.6 TBA硫代巴比妥酸法  24
    2.2.7 抑制肝脏线粒体脂质过氧化检测法  24-25
    2.2.8 还原力测定  25
    2.2.9 总抗氧化能力  25-26
    2.2.10 抑制双氧水诱导的红细胞溶血能力实验  26
    2.2.11 抑制蛋白质羰基生成法  26-27
    2.2.12 质粒DNA氧化损伤实验  27
  2.3 数据处理  27-28
  2.4 实验结果  28-39
    2.4.1 清除DPPH自由基的方法  28-29
    2.4.2 结晶紫法结果  29-30
    2.4.3 亚硝基R盐-Co~(2+)褪色法  30
    2.4.4 利用2-脱氧-D-核糖法测定针对羟自由基的清除实验  30-31
    2.4.5 邻苯三酚自氧化法测量清除超氧阴离子实验结果  31-32
    2.4.6 体外利用TBA法脂质过氧化的检测结果  32-33
    2.4.7 对肝脏线粒体脂质过氧化检测结果  33-34
    2.4.8 体外还原力检测实验的结果  34-35
    2.4.9 总抗氧化能力的测定结果  35-36
    2.4.10 双氧水诱导的红细胞溶血实验的结果  36-37
    2.4.11 抑制蛋白质羰基化检测的结果  37-38
    2.4.12 质粒DNA氧化损伤实验结果  38-39
  2.5 结果的排序  39-41
第3章 体外抗氧化方法的评价分析与讨论  41-46
  3.1 不同体外评价方法之间的相关性分析  41-43
  3.2 不同体外评价方法的结果排序比较  43-46
第4章 结论  46-47
参考文献  47-54
附录  54-56
致谢  56-57
攻读学位期间的研究成果  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生物化学、分子生物学
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