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FN在人绒毛膜癌细胞的表达及FUDR对绒癌细胞抑制作用研究

作　者: 周俐
导　师: 刘惠宁
学　校: 中南大学
专　业: 妇产科
关键词: 纤维粘连蛋白(FN) 人绒毛膜癌侵袭转移 FUDR
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

[目的](1)检测纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)在人绒毛膜癌不同侵袭力细胞JEG-3和JAR内的表达,探讨FN高表达与绒毛膜癌侵袭转移的关系；(2)研究氟尿嘧啶脱氧核苷(floxuridine,FUDR)对绒毛膜癌高侵袭力JEG-3细胞生长能力的抑制作用,并与5-氟尿嘧啶进行比较,观察两种药物影响JEG-3细胞生长能力的差异并比较药物作用后JEG-3细胞中FN的表达改变。【方法】(1)运用Matrigel体外侵袭实验方法,检测两种绒毛膜癌细胞JEG-3和JAR侵袭能力,并比较差异；(2)运用荧光定量—聚合酶链反应(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western blotting)方法,检测绒毛膜癌细胞JEG-3和JAR中FN mRNA和蛋白表达情况,并比较两者间的差异；(3)用不同浓度(0.05、0.25、0.5、2.5和5 ug/m1)氟尿嘧啶脱氧核苷(FUDR)和5-氟尿嘧啶(5-FU),分别处理体外培养的高侵袭性绒毛膜癌细胞株JEG-3,在处理后48小时,以MTT比色法检测两种药物对JEG-3细胞生长增殖的影响,计算相对生存率,比较两种药物抑制JEG-3细胞生长能力的差异并检测FN蛋白表达。【结果】(1)Matrigel体外侵袭实验证实,JEG-3细胞较JAR细胞的侵袭能力明显增强(P<0.01)；(2)在两种细胞中均检测到FN mRNA表达,相对低侵袭性JAR细胞,高侵袭性JEG-3细胞中FN mRNA表达明显增加(P<0.001),JEG-3细胞中FN蛋白表达水平较JAR细胞亦明显增加(P<0.05)；(3)MTT抑制实验证实,FUDR和5-FU均对JEG-3细胞的生长能力具有抑制作用,且呈剂量依赖性。在5、2.5和0.5ug/ml药物浓度处理下,FUDR对JEG-3细胞生长抑制能力明显强于5-FU的作用(P<0.05)：最低有效浓度0.5ug/ml处理后,JEG-3细胞FN蛋白表达水平以FUDR处理的较5-FU处理要明显降低。【结论】(1)FN参与绒毛膜癌的发生和发展,与绒毛膜癌的侵袭和转移相关。(2)FUDR能抑制高侵袭力绒毛膜癌细胞JEG-3生长能力,在一定剂量作用下,抑制能力强于5-FU。JEG-3细胞以FUDR处理的较5-FU处理FN蛋白表达水平降低。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
目录  9-10
英文缩略语说明  10-11
第一章前言  11-13
第二章材料与方法  13-25
  2.1 实验材料  13-15
  2.2 实验方法  15-25
第三章结果  25-32
  3.1 人绒毛膜癌JEG-3、JAR细胞的培养  25-26
  3.2 Matrigel实验验证JEG-3、JAR细胞间侵袭力的差异  26-27
  3.3 Real-time PCR检测JEG-3、JAR细胞间FN mRNA表达的差异  27-28
  3.4 Western blotting检测JEG-3、JAR细胞间FN蛋白表达的差异  28
  3.5 FUDR和5-FU对细胞生长增殖抑制试验结果  28-31
  3.6 Western blotting检测5-FU和FUDR作用后及空白对照组JEG-3细胞FN蛋白表达的差异  31-32
第四章讨论  32-37
  4.1 绒毛膜癌的侵袭和转移  32-33
  4.2 FN的异常表达与肿瘤发生  33-34
  4.3 氟尿嘧啶脱氧核苷(FUDR)对肿瘤细胞的作用  34-37
第五章结论  37-38
参考文献  38-41
综述  41-50
  FN、氟尿苷的性质及作用  41-50
致谢  50-51
攻读学位期间主要成果  51

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