学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

HBx对DNA甲基转移酶3A/3B表达影响的研究

作　者: 李艳艳
导　师: 刘国珍
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: HBx 乙型肝炎病毒 肝细胞癌 DNMT3A/3B
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 56次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的将乙肝病毒X基因(HBV X)导入人源性永生化非瘤性肝细胞株QSG7701细胞,观察稳定转染后QSG7701细胞中DNMT3A/3B的表达情况。方法①本研究室前期构建好的重组表达质粒pcDNA-X及空载体pcDNA3.0分别转染QSG7701细胞,经含G418的选择性培基筛选获得稳定转染HBV-X基因的细胞克隆(pcDNA-X/QSG7701)及稳定转染空载体pcDNA3.0的细胞克隆(pcDNA3.0/QSG7701)。RT-PCR, Western blot分别检测转染细胞中HBX mRNA和HBx蛋白的表达。②Real time-PCR检测pcDNA-X/QSG7701细胞、pcDNA3.0/QSG7701细胞、QSG7701细胞中DNMT3A/3B mRNA的表达差异。③免疫细胞化学方法检测pcDNA-X/QSG7701细胞、pcDNA3.0/QSG7701细胞、QSG7701细胞中DNMT3A/3B蛋白的表达差异。结果①RT-PCR, Western blot检测显示重组表达质粒pcDNA-X转染的QSG7701细胞(pcDNA-X/QSG7701)中有HBV X mRNA及HBx蛋白的稳定表达。②Real time-PCR检测显示：pcDNA-X/QSG7701与pcDNA3.0/QSG771、未转染的QSG7701细胞相比,DNMT3A/3B mRNA表达均显著升高。(P<0.05)③免疫细胞化学方法检测显示：pcDNA-X/QSG7701与pcDNA3.0/QSG7701、未转染的QSG7701细胞相比,DNMT3A/3B蛋白的表达均显著升高(P<0.05)。结论采用人源性永生化非瘤性肝细胞QSG7701为研究对象,建立了HBV-X稳定转染的细胞系pcDNA-X/QSG7701,为进一步探讨HBx在HCC的发生发展过程中所起的作用,提供了一个有价值的细胞模型。HBV-X稳定转染的人源性永生化非瘤性肝细胞QSG7701(pcDNA-X/QSG7701)中DNMT3A/3B mRNA和蛋白的表达均明显升高,提示HBV-X基因在mRNA及蛋白水平能上调转染细胞中DNMT3A/3B的表达,而细胞中DNMT3A/3B表达的增加是否能进一步影响癌基因、抑癌基因的表达水平,从而导致细胞癌变,有待进一步研究。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
缩略词表  9-10
第一章 前言  10-12
第二章 材料和方法  12-23
  2.1 材料  12
  2.2 主要试剂  12-13
  2.3 主要实验仪器  13
  2.4 引物  13-14
  2.5 实验方法  14-23
第三章 实验结果  23-31
  3.1 转染细胞中HBX mRNA的表达  23
  3.2 Western Blot检测转染细胞中HBx蛋白的表达  23-24
  3.3 Real Time-PCR检测pcDNA-X/QSG7701细胞,pcDNA3.0/QSG7701细胞和QSG7701细胞中DNMT3A mRNA表达情况  24-25
  3.4 Real Time-PCR检测pcDNA-X/QSG7701细胞,pcDNA3.0/QSG7701细胞和QSG7701细胞中DNMT3B mRNA表达情况  25-26
  3.5 免疫细胞化学方法检测pcDNA-X/QSG7701细胞,pcDNA3.0/QSG7701细胞和QSG7701中DNMT3A蛋白表达情况  26-28
  3.6 免疫细胞化学方法检测pcDNA-X/QSG7701细胞,pcDNA3.0/QSG7701细胞和QSG7701细胞中DNMT3B蛋白表达情况  28-31
第四章 讨论  31-34
结论  34-35
参考文献  35-38
综述  38-48
致谢  48-49
攻读硕士学位期间主要的研究成果及发表的论文  49

相似论文

  1. STAT3、MMP-2在肝细胞癌中的临床意义,R735.7
  2. 绿茶提取物EGCG抗乙型肝炎病毒的分子机理研究,R285
  3. 河南省樱桃谷鸭乙型肝炎病毒（DHBV）分子流行病学调查及FNC抗DHBV体内试验研究,S858.32
  4. 安徽省部分地区乙型肝炎分子流行病学初步研究,R512.62
  5. 基于化学发光微粒子免疫分析法对乙型肝炎抗HBc和抗HBe的精密测定,R512.6
  6. 恩替卡韦治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化72周临床疗效观察,R512.62
  7. 乙型肝炎病毒相关性肾炎尿液蛋白质组学的研究分析,R692.3
  8. 恩替卡韦耐药慢性乙型肝炎病毒全基因特征、质粒构建及其挽救治疗,R512.62
  9. 青岛地区乙肝病毒BCP基因突变与乙肝相关性原发性肝癌的相关性研究,R512.62
  10. 乙型肝炎病毒核心基因的PCR-RELP图案对中国肝细胞癌和肝硬化人群的临床意义,R735.7;R575.2
  11. C57BL/6小鼠乙型肝炎病毒感染模型中细胞因子研究,R512.62
  12. HBX在卵圆细胞中上调AKT信号对c-Jun表达的影响,R735.7
  13. MiRNA-148a→DNA甲基转移酶1→MiRNA-148a启动子甲基化在肝细胞癌发生中的意义,R735.7
  14. 乙肝病毒X蛋白对肝癌HepG2细胞DNA双链断裂修复的影响,R735.7
  15. 原发性肝癌和慢性肝病组织中AXL和Prostasin蛋白的表达及其临床意义,R575
  16. HBV核心区基因真核表达的实验研究,R512.62
  17. 第二代化学发光试剂检测乙肝表面抗原的多中心评估,R446.6
  18. 猪源乙型肝炎病毒的分子流行病学调查,R181.3
  19. 急性乙型肝炎患者HBV特异性CD8~+T淋巴细胞受体α和β链取用的研究,R392
  20. HBVprec/c shRNA慢病毒真核表达载体的构建及其对HBV增值的影响,R735.7
  21. 抗肿瘤血管生成治疗抑制肝癌生长和转移复发及相关机理研究,R735.7

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com