学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

地衣芽孢杆菌对坏死性肠炎雏鸡回肠组织及细胞因子动态变化影响

作　者: 刘丽达
导　师: 倪学勤；曾东
学　校: 四川农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 雏鸡地衣芽孢杆菌坏死性肠炎(NE) 细胞因子
分类号: S858.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 89次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本试验主要研究了由产气荚膜梭菌引起的雏鸡肠炎以及使用地衣芽孢杆菌预防治疗雏鸡肠炎回肠组织学变化和采用实时荧光定量PCR检测IFN-α, IFN-γ,IL-1β,IL-6四种炎性细胞因子在鸡肠道组织中的表达量变化。本实验选择产气荚膜梭菌标CVCC2030作为病原菌,选择从健康鸡肠道分离的一株地衣芽孢杆菌作为实验菌株；实验动物为健康一日龄铁脚麻鸡,分为感染试验和芽孢杆菌防治试验。感染试验,一日龄健康鸡60羽,随机分为空白组,感染组,每组30只。感染组15日龄灌喂球虫(100万个／ml,lml),17-20日龄灌喂Cp(产气荚膜梭菌)(108CFU／lmL,d),空白组喂相同剂量生理盐水。芽孢杆菌防治试验,选取一日龄健康鸡150羽,随机分为空白组(K组),感染组(G组),预防组(y组),治疗组(Z组),空白组和感染组每组30只,预防组根据添加菌粉Ⅰ剂量不同分为0.05%,0.1%和0.2%三组；治疗组添加不同剂量菌粉Ⅱ分为0.1%,0.2%,0.4%三组,每组15只。空白组与感染组饲喂基础日粮,预防组饲喂添加不同剂量菌粉Ⅰ的基础日粮,治疗组1至20日龄饲喂添加0.05%菌粉Ⅰ的基础日粮,20日龄后饲喂添加不同剂量菌粉Ⅱ的基础日粮。感染组,预防组,治疗组15日龄灌喂球虫(100万／ml,1ml),17-20日龄灌喂Cp(108,1mL)致鸡肠炎,空白组喂相同剂量生理盐水。试验表明：1.外周血白细胞数变化：感染组白细胞数高于空白、预防和治疗三组,且差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)；预防组白细胞数量高于空白组,但低于感染组；治疗组与空白组差异不显著(P>0.05)；预防组0.1%,治疗组0.4%各时间段白细胞数与空白组最接近,且都在正常范围内,而感染组21到25日龄白细胞数都高出了正常范围。2.回肠产气荚膜梭菌菌数变化：攻毒前各组鸡回肠中产气荚膜梭菌的数量差异不显著(P>0.05),攻毒后感染组高于其他组,差异极显著(P<0.01),预防组回肠产气荚膜梭菌数高于空白组差异极显著(P<0.01)但低于感染组差异极显著(P<0.01),随着益生菌剂量增大Cp的数量减少,但不显著(P>0.05)。治疗组益生菌有效抑制了外源产气荚膜梭菌在回肠的定植,Cp数量低于感染组,差异极显著(P<0.01)与空白组数量差异不显著(P>0.05)。3.回肠组织细胞因子表达量变化：产气荚膜梭菌感染前雏鸡14日龄时,各组IFN-α,IFN-γ,IL-1β,IL-6表达差异不显著(P>0.05)；21日龄时感染组IFN-γ,IL-1β表达水平显著高于空白组(P<0.01),IFN-α,IL-6水平略高于空白组但IFN-α差异不显著(P>0.05)；23日龄时感染组IFN-γ,IL-1β,IL-6水平高于空白组,差异极显著(P<0.01),IFN-α水平差异不显著(P>0.05)；25日龄时,感染组只有IFN-γ水平高于空白组,差异显著(P<0.05),其他因子略有差异,但差异不显著(P>0.05)；28日龄时四种细胞因子的表达水平两组都无显著差异(P>0.05)。用芽孢杆菌预防治疗时,14日龄空白组,感染组,预防组细胞因子表达无差异(P>0.05)：21日龄预防组IL-1β,IFN-γ,IL-6高于空白组,差异显著(P<0.05),IL-1β低于感染组差异极显著(P<0.01),其他因子与感染组差异不显著(P>0.05)；23日龄预防组IL-1β回复到正常水平,IFN-γ,IL-6略低于感染组,差异不显著(P>0.05)；28日龄时所有组细胞因子和空白组都无显著差异(P>0.05)。治疗组IL-1β,IFN-γ,IL-6表达量总体上都低于感染组,23日龄显著(P<0.01),但高于空白组(IL-1β、IL-6P<0.05,IFN-γP<0.01)；25日龄时表达量低于感染组差异显著(P<0.05),与空白组无显著差异(P>0.05),28日龄三组中4种因子表达量都无显著差异(P>0.05),IFN-α表达量变化无明显规律性,与空白组差异不显著。4.回肠绒毛组织学结构变化：空白组鸡回肠肠绒毛完整,无出血或瘀血现象,柱状细胞排列整齐,杯状细胞排列有序；感染组回肠肠绒毛结构不完整,绒毛固有层中有明显的出血或瘀血现象,柱状细胞排列紊乱,绒毛断裂,脱落,有自溶现象,杯状细胞明显增多,黏液含量增多,且可见杯状细胞破裂现象；预防,治疗组肠绒毛较完整,结构正常。预防组杯状细胞数量间于空白组与感染组之间；治疗组淋巴细胞大量增殖,且淋巴小结数量增多,杯状细胞比感染组少。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
第一部分文献综述  11-21
  1. 产气荚膜梭菌与坏死性肠炎  11-13
    1.1 产气荚膜梭菌简介  11
    1.2 家禽坏死性肠炎  11-12
    1.3 产气荚膜梭菌与球虫联合感染  12-13
  2 炎症因子与坏死性肠炎的研究进展  13-16
    2.1 炎性肠病与炎性因子研究  13
    2.2 炎性细胞因子  13-16
      2.2.1 白介素  13-15
      2.2.2 其他炎性因子  15-16
  3. 实时荧光定量在mRNA表达中的应用  16-19
    3.1 实时荧光定量原理  16-17
    3.2 实时荧光定量PCR检测细胞因子mRNA的应用  17-19
  4. 益生菌与炎性肠炎  19-21
    4.1 益生菌的研究进展及概况  19-20
    4.2 益生菌对炎性肠炎影响的研究进展  20-21
  5. 存在的问题及实验的目的意义  21
第二部分试验研究  21-46
  1. 试验材料  21-23
    1.1 试验菌株  21
    1.2 试验试剂  21-23
    1.3 主要试验仪器  23
  2. 试验方法  23-32
    2.1 荧光定量PCR检测细胞因子mRNA方法建立  23-26
      2.1.1 RNA提取与反转录  23-24
      2.1.2 标准品制备  24-25
      2.1.3 实时荧光定量PCR条件优化  25
      2.1.4 标准曲线的绘制  25-26
    2.2 菌种的活化、培养与攻毒液制作  26
      2.2.1 培养基的制作  26
      2.2.2 菌种活化  26
      2.2.3 攻毒菌液制作  26
    2.3 芽孢杆菌菌粉制备  26
    2.4 动物试验设计  26-29
      2.4.1 试验动物  27
      2.4.2 基础日粮与试验日粮  27-28
      2.4.3 动物试验  28-29
      2.4.4 样品采集  29
    2.5 试验指标测定  29-32
      2.5.1 外周血白细胞计数  29
      2.5.2 回肠产气荚膜梭菌活菌计数  29-30
      2.5.3 细胞因子在肠道中表达量的检测  30-31
      2.5.4 回肠绒毛组织学结构切片  31-32
  3 数据处理  32
  4 结果与分析  32-46
    4.1 荧光定量PCR检测细胞因子mRNA方法建立  32-36
      4.1.1 RNA质量检测  32
      4.1.2 特异性分析  32-34
      4.1.3 实时荧光定量PCR的优化条件  34-36
    4.2 外周血白细胞数量变化及分析  36-39
    4.3 回肠产气荚膜梭菌菌数变化  39-40
    4.4 回肠组织细胞因子表达量变化  40-44
    4.5 回肠绒毛组织学结构变化  44-46
第三部分讨论与全文结论  46-55
  1. 讨论  46-54
    1.1 荧光定量PCR检测细胞因子mRNA方法建立  46-47
    1.2 芽孢杆菌对肠道产气荚膜梭菌的影响  47-49
    1.3 感染与防治组鸡外周血白细胞数量变化分析  49
    1.4 回肠组织炎性细胞因子与肠炎的关系  49-52
      1.4.1 产气荚膜梭菌与球虫联合感染对炎性细胞因子在鸡肠道中表达量的影响  49-51
      1.4.2 芽孢杆菌对坏死性肠炎鸡肠道组织细胞因子的影响  51-52
    1.5 产气荚膜梭菌及芽孢杆菌对小肠绒毛组织学的影响  52-54
  2. 全文结论  54-55
参考文献  55-64
致谢  64-65
攻读学位期间发表的学术论文目录  65

地衣芽孢杆菌对坏死性肠炎雏鸡回肠组织及细胞因子动态变化影响

内容摘要

全文目录

相似论文