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MBL介导的人角膜上皮细胞对烟曲霉菌的固有免疫反应

作　者: 张京芬
导　师: 赵桂秋
学　校: 青岛大学
专　业: 眼科学
关键词: 甘露糖结合凝集素 角膜上皮细胞 烟曲霉菌
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的研究甘露糖结合凝集素(mannan-binding lectin, MBL)在体外培养的人角膜上皮细胞(HCECs)中的表达,及用自制烟曲霉菌孢子抗原刺激液刺激后的细胞中MBL及炎症细胞因子的表达变化,分析MBL在角膜烟曲霉菌感染中的作用。方法体外培养的HCECs细胞增殖达到80%-90%融合时,弃掉培养基,更换为无血清培养基培养24h后,实验组加自制的灭活的烟曲霉菌孢子抗原刺激液,分别于刺激的0h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h收取细胞,逆转录RT-PCR检测正常HCECs及烟曲霉菌孢子抗原刺激液刺激后的HCECs中MBL mRNA的表达；酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测正常HCECs及烟曲霉菌孢子抗原刺激液刺激后的HCECs中MBL的浓度及其HCECs培养上清中MBL、NF-κB、IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-10的浓度,观察刺激不同时间后各组HCECs培养上清中MBL、NF-κB、IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-10的含量变化。结果正常HCECs有微量MBL mRNA的表达。烟曲霉菌孢子抗原刺激HCECs后,MBL mRNA表达逐渐增多,在刺激2h时达高峰,之后逐渐下降,与正常HCECs比较差异具有显著性(P<0.05)；ELISA测得HCECs中MBL在刺激后2h含量达高峰,与正常HCECs比较差异具有显著性(P<0.05)；HCECs培养上清中MBL表达量逐渐下降,刺激后各时间点与刺激0.5h后HCECs比较差异具有显著性(P<0.05)；NF-κB、IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-10分别在刺激2h、1h、2h、4h、6h后含量达高峰,各时间点与正常HCECs比较差异具有显著性(P<0.05)。结论1.体外培养的人角膜上皮细胞可表达MBL。2.MBL参与了人角膜上皮细胞对烟曲霉菌孢子抗原的识别。3.MBL可介导人角膜上皮细胞NF-κB通路的活化并可诱导下游炎性细胞因子TNF-α、IL-β、IL-6和IL-10的表达,提示MBL可在角膜抵御真菌感染早期固有免疫中起作用。

全文目录


摘要  2-3
Abstract  3-6
引言  6-8
第1章 材料与方法  8-17
  1.1 实验材料  8-10
    1.1.1 实验主要试剂及耗材  8-9
    1.1.2 所需仪器  9-10
  1.2 实验方法  10-16
    1.2.1 细胞培养  10
    1.2.2 烟曲霉菌孢子抗原刺激液的制备  10-11
    1.2.3 人角膜上皮细胞的孢子抗原刺激实验  11
    1.2.4 RT-PCR  11-14
    1.2.5 ELISA  14-16
  1.3 统计学处理  16-17
第2章 结果  17-23
  2.1 体外培养的人角膜上皮细胞的形态观察  17
  2.2 烟曲霉菌的培养及形态观察  17
  2.3 RT-PCR结果  17-18
  2.4 ELISA结果  18-23
第3章 讨论  23-27
结论  27-28
参考文献  28-33
附录  33-50
攻读学位期间的研究成果  50-51
致谢  51-52

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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