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蛇床子中杀灭鱼类指环虫的活性成分研究

作　者: 程超
导　师: 王高学
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 水生生物学
关键词: 蛇床子 指环虫 活性成分
分类号: S948
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


指环虫引起的鱼类寄生虫病一直是鱼类养殖中最常见的病害之一,此病流行广、传播快、危害深,且其发病率和危害性正在逐年增长。目前,国内外对于此病的防治主要是移植人药、兽药和部分农药等化学药物,长期使用带来了环境污染、药物残留、耐药性等一系列问题。因此,从植物中寻找新的杀虫活性物质或药物前体,不仅是有效创制新药的经济、快捷途径,而且也是对植物资源的合理开发与利用。本研究以此为出发点开展了杀虫活性植物筛选、活性部位筛选、杀虫活性成分跟踪分离、波谱分析与结构解析等工作,并取得了以下结果:1.杀虫活性植物的筛选:通过药效试验,测定了22种植物提取物对指环虫的杀灭活性。试验结果表明:48 h各种植物提取物对中型指环虫的最高杀灭率依次为:蛇床为100% ;两面针、木通、吴茱萸、牛心朴子为80%;夹竹桃、徐常卿为70%;草果、苦木、北乌头、滨蒿、蒺藜、白芷、山柰、榧在20%～50%;在1000 mg?L-1范围内,生姜、辣椒、仙茅、大风子、泽漆、相思子、雷丸没有明显杀虫活性。2.蛇床子杀指环虫活性部位的研究:分别采用5种极性不同的溶剂对蛇床子进行提取,并测定不同溶剂提取物的杀指环虫活性。结果显示:氯仿提取物、丙酮提取物、乙醇提取物对指环虫的最佳杀虫浓度均为70 mg?L-1(按生药计),杀虫率为100%;石油醚提取物最佳杀虫浓度为150 mg?L-1(按生药计),而杀虫率只达到86.0%;水提物在浓度为1000 mg?L-1(按生药计)时仍对指环虫没有表现出杀灭效果。3.蛇床子中杀指环虫活性成分的跟踪分离与结构鉴定:依次用石油醚、氯仿、甲醇、水和碱水对乙醇浸膏进行固液萃取,分别测定各萃取部分的杀虫效果,得出石油醚萃取物和氯仿萃取物对指环虫具有杀灭效果。采用硅胶柱层析法,以石油醚-乙酸乙酯(50:1、30:1、10:1、5:1、3:1、2:1、1:1、0:1,甲醇和水洗柱)作为洗脱系统,对蛇床子石油醚萃取物和氯仿萃取物进行分离,TLC检测,得到8个流分组A～H,经药效测定C流分组具有杀虫活性。以石油醚-乙酸乙酯-甲醇(10:1:0.05、8:1:0.1、20:3:0.1、5:1:0.2、3:1:0.3、1:1:0.4、1:2:0.5,乙酸乙酯、甲醇和水洗柱)作为洗脱系统,对C流分组进行硅胶柱层析分离,得到8个流分组C1～C8,经药效测定C2和C4流分组具有杀虫活性。以氯仿-甲醇(1:0、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1)作为洗脱系统,对C2流分组进行硅胶柱层析分离,得到6个流分组C2-1～C2-6,其中C2-2为晶体物质,药效测定仅C2-2具有杀虫活性。以氯仿-甲醇(1:1、1:1.5、1:2、1:3、1:5、甲醇)作为洗脱系统,对C4流分组进行葡聚糖-LH20柱层析分离,得到9个流分组C4-1～C4-9,其中C4-3、C4-6、C4-8为晶体物质,经测定仅C4-8具有杀虫活性。C2-2和C4-8的活性测定结果显示,C2-2 48 h的最佳杀虫浓度为1.6 mg?L-1,C4-8为9.5 mg?L-1。通过对活性化合物进行熔点测定,并结合质谱(EI-MS)、红外光谱(IR)、质子核磁共振谱(1H-NMR)、核磁共振碳谱(13C-NMR)等波谱对其结构进行鉴定。C2-2鉴定为蛇床子素(C15H16O3), C4-8鉴定为异虎儿草素(C13H10O5)。4.蛇床子素对鲫鱼的急性毒性试验:以鲫鱼为材料,研究了蛇床子素的急性毒性。通过试验发现,蛇床子素在浓度为5.094～5.664 mg?L-1时,对鲫鱼开始产生毒性作用,致死率为10%。第24 h、48 h、72 h和96 h时的LC5 0依次为7.7323、6.8161、6.7627和6.4433 mg?L-1,安全浓度为1.5890 mg?L-1。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-12
第一章 文献综述  12-28
  1.1 指环虫及其病害的研究现状  12-18
    1.1.1 指环虫及其生物学特征  12-14
      1.1.1.1 指环虫的外部形态特征  12-13
      1.1.1.2 指环虫的感染方式和寄生行为  13
      1.1.1.3 指环虫的生活史  13
      1.1.1.4 指环虫在鳃上的分布  13-14
    1.1.2 指环虫病及其防治  14-18
      1.1.2.1 指环虫病的病原  14
      1.1.2.2 指环虫病的流行情况  14
      1.1.2.3 指环虫病的主要症状和病理损害  14-15
      1.1.2.4 指环虫病的诊断方法  15
      1.1.2.5 指环虫病的防治  15-17
      1.1.2.6 指环虫病的危害性  17-18
  1.2 蛇床子的化学成分和药理活性研究  18-26
    1.2.1 蛇床子的化学成分  18-22
      1.2.1.1 香豆素类  20
      1.2.1.2 挥发油  20-22
      1.2.1.3 微量元素  22
      1.2.1.4 其他成分  22
    1.2.2 药理作用  22-26
      1.2.2.1 抗肿瘤  22-23
      1.2.2.2 抗诱变作用  23
      1.2.2.3 对心血管系统的药理作用  23
      1.2.2.4 免疫增强作用  23-24
      1.2.2.5 对中枢神经系统的作用  24
      1.2.2.6 对生殖系统的作用  24
      1.2.2.7 对内分泌系统的作用  24-25
      1.2.2.8 对骨代谢的作用  25
      1.2.2.9 抗氧化作用  25
      1.2.2.10 抗炎作用  25
      1.2.2.11 抗菌作用  25-26
      1.2.2.12 杀虫作用  26
      1.2.2.13 其他作用  26
  1.3 选题依据和研究意义  26-28
第二章 杀灭指环虫天然植物的筛选  28-34
  2.1 材料与方法  28-30
    2.1.1 试验材料  28-29
      2.1.1.1 试验动物  28
      2.1.1.2 供试样品  28
      2.1.1.3 主要试剂  28
      2.1.1.4 主要仪器  28-29
    2.1.2 方法  29-30
      2.1.2.1 植物供试液的制备  29
      2.1.2.2 寄生虫的活体感染  29
      2.1.2.3 杀虫活性测定  29-30
      2.1.2.4 杀虫活性判断  30
  2.2 结果  30-32
    2.2.1 杀虫药物初筛  30
    2.2.2 杀虫药物活性的测定  30-32
  2.3 讨论  32-33
  2.4 小结  33-34
第三章 蛇床子杀灭鱼类指环虫的活性部位研究  34-40
  3.1 材料与方法  34-35
    3.1.1 材料  34
      3.1.1.1 试验动物  34
      3.1.1.2 供试植物样品  34
      3.1.1.3 试剂  34
      3.1.1.4 仪器设备  34
    3.1.2 试验方法  34-35
      3.1.2.1 植物试液的制备  34-35
      3.1.2.2 杀虫有效活性部位跟踪  35
  3.2 结果与分析  35-38
    3.2.1 不同溶剂提取物在不同浓度下对指环虫杀灭结果  35-37
    3.2.2 杀虫活性部位  37-38
  3.3 讨论  38-39
  3.4 小结  39-40
第四章 蛇床子中杀虫活性成分跟踪分离与结构鉴定  40-54
  4.1 材料与方法  40-45
    4.1.1 试验材料  40-41
      4.1.1.1 试验动物  40
      4.1.1.2 供试样品  40
      4.1.1.3 主要试剂  40
      4.1.1.4 主要仪器  40-41
    4.1.2 方法  41-45
      4.1.2.1 活性成分跟踪分离  41-45
      4.1.2.2 活性化合物的结构鉴定  45
  4.2 结果  45-53
    4.2.1 活性成分跟踪分离结果  45-49
      4.1.2.1 供试样品提取和初步分离  45-46
      4.1.2.2 石油醚和氯仿提取部分的柱层析分离及活性跟踪测定结果  46
      4.1.2.3 C 流分组的柱层析分离及活性跟踪测定结果  46-49
      4.1.2.4 C_2 流分组的分离纯化以及活性测定结果  49
      4.1.2.5 C_4 流分组的分离纯化以及活性测定结果  49
    4.2.2 活性单体的杀虫活性测定  49-51
      4.2.2.1 C_(2-2) 的活性测定  50
      4.2.2.2 C_(4-8) 的活性测定  50-51
    4.2.3 活性单体的结构鉴定  51-53
      4.2.3.1 C_(2-2) 的结构鉴定  51-52
      4.2.3.2 C_(4-8) 的结构鉴定  52-53
  4.3 讨论  53
  4.4 小结  53-54
第五章 蛇床子素对鲫鱼的急性毒性试验  54-59
  5.1 材料与方法  54-55
    5.1.1 材料  54
      5.1.1.1 供试样品  54
      5.1.1.2 试验动物  54
      5.1.1.3 试验仪器  54
    5.1.2 试验方法  54-55
      5.1.2.1 试验条件  54
      5.1.2.2 试验药物浓度的设定  54-55
      5.1.2.3 蛇床子素最低致死浓度范围、半数致死浓度（LC_(50)）  55
      5.1.2.4 蛇床子素安全浓度的计算  55
  5.2 结果与分析  55-58
    5.2.1 蛇床子素半数致死浓度（LC_(50)）  55-56
      5.2.1.1 蛇床子素各试验浓度在不同时间内对鲫鱼致毒情况  55-56
      5.2.1.2 最低致死浓度范围、半数致死浓度（LC_(50)）  56
    5.2.2 安全浓度计算结果  56-58
  5.3 讨论  58
  5.4 小结  58-59
结论  59-60
参考文献  60-66
附录  66-73
致谢  73-74
作者简介  74

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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产保护学 > 水产药物学、药理学
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