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奶山羊黄体弥散性神经内分泌细胞标志物的表达特点

作　者: 蒋田园
导　师: 陈树林
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 神经生物学
关键词: 弥散性神经内分泌细胞标记物黄体免疫组化双标记
分类号: Q4
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

为了研究山羊卵巢中是否存在弥散性神经内分泌系统(DNES)细胞及其分布情况,采用了敏感性较高的免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法、超微结构观察及计算机图象分析等方法对妊娠中期奶山羊卵巢黄体中弥散性神经内分泌细胞标志物的分布进行了研究。结果显示:一些黄体细胞胞质中含有5-羟色胺(5-HT)、S-100蛋白、神经特异性烯醇化酶(NSE)、突触素(SYP)免疫反应阳性物质。神经特异性烯醇化酶(NSE)、突触素(SYP)、5-羟色胺(5-HT)、S-100蛋白均为弥散性神经内分泌系统光谱的,共同的细胞标记物。根据免疫反应复合物呈色的程度不同可分为强阳性、中等阳性、弱阳性三种。这些细胞散在或成团分布,多呈圆形、卵圆形或三角形,一些细胞具有明显的突起。在电镜下观察,一些细胞含有分泌颗粒,分泌颗粒散在分布于胞浆内,它们形态不一、大小不等,直径约100-500nm,有的细胞内的颗粒含有明显的核心和晕轮,上述结果表明,山羊卵巢黄体中的这些细胞属DNES细胞。山羊黄体中DNES细胞所含的S-100蛋白、5-HT、NSE和SYP在非黄体细胞中未检测到。结果提示:这些物质与黄体的形成及退化有极为密切的关系为了探讨5-羟色胺(5-HT)、S-100蛋白、神经特异性烯醇化酶(NSE)和突触素(SYP)四种弥散性神经内分泌细胞标志物是否在黄体的同一细胞中共存,本实验采用免疫荧光双标记法结合激光扫描共聚焦显微镜观察对四种弥散性神经内分泌细胞标志物的分布进行了检测。结果显示:在妊娠中期奶山羊卵巢黄体细胞中,首次观察到了S-100蛋白和SYP有共同存在于一个细胞的现象。且SYP和S-100蛋白共存的细胞主要分布在黄体周边,少数散布于中央区域。S-100与5-HT和5-HT与SYP共存的细胞均匀分布于整个黄体中。阳性反应主要出现于大黄体细胞,但在黄体被膜下方及小梁两侧等小黄体细胞聚集区域也可见一定数量的阳性细胞。在激光扫描共聚焦显微镜下观察,可看到细胞背景色为黑色,单标记阳性反应的组织细胞胞质为深浅不等的红色或绿色,双阳性细胞胞质为深浅不等的黄色。S-100蛋白与NSE、S-100与5-HT、S-100与SYP、NSE与5-HT、NSE与SYP、5-HT与SYP免疫阳性细胞轮廓清楚,胞质中含有深浅不等黄色的染色颗粒,细胞核不着色,呈圆形点状,核位于细胞中央或偏于一侧。细胞形态有圆形、卵圆形、长梭形、三角形等。结果提示:属于弥散性神经内分泌细胞的黄体细胞,必然存在不同的类型,它们分泌的产物和行驶的功能不同。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-11
第一章弥散性神经内分泌系统的综述  11-19
  1.1 弥散性神经内分泌系统概念  11-12
  1.2 DNES 细胞的组成、分泌物及其功能  12-13
    1.2.1 DNES 细胞的组成和分泌物  12
    1.2.2 DNES 细胞分泌物的功能  12-13
  1.3 DNES 细胞的形态结构特点  13-14
    1.3.1 DNES 细胞的一般形态结构  13-14
    1.3.2 细胞超微结构特点  14
    1.3.3 分泌颗粒的嗜银性  14
  1.4 DNES 细胞鉴别方法  14-15
    1.4.1 银染法  14
    1.4.2 超薄切片观察法  14-15
    1.4.3 组织化学方法  15
    1.4.4 免疫组织化学方法  15
    1.4.5 原位杂交技术  15
  1.5 DNES 细胞标志物  15-16
    1.5.1 神经元特异性烯醇化酶(neuronspecificeno-lase, NSE)  15
    1.5.2 突触素(synaptophysin, SYP)  15
    1.5.3 S-100 蛋白(S-100protein)  15-16
    1.5.4 5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)  16
    1.5.5 铬粒素(chromogranin)，或称嗜铬粒蛋白  16
    1.5.6 其他  16
  1.6 DNES 与疾病及免疫的关系  16-19
    1.6.1 DNES 与疾病的关系  16
    1.6.2 DNES 与免疫的关系  16-19
第二章 DNES 细胞标志物的研究进展  19-37
  2.1 5-羟色胺  19-22
    2.1.1 5-HT 的生物合成  19-20
    2.1.2 5-HT 能神经元在中枢神经系统的分布  20-21
    2.1.3 5-HT 受体  21
    2.1.4 5-HT 的生物学功能  21-22
    2.1.5 展望  22
  2.2 神经元特异性烯醇化酶  22-27
    2.2.1 NSE 组成与分布  23-24
    2.2.2 NSE 与神经系统疾病  24-26
    2.2.3 展望  26-27
  2.3 突触素  27-32
    2.3.1 突触素的结构  27-28
    2.3.2 突触素的分类和生化特征  28
    2.3.3 突触素的组织学分布  28-30
    2.3.4 突触素的应用  30-32
    2.3.5 展望  32
  2.4 S-100 蛋白  32-37
    2.4.1 S-100 蛋白的一般特征  32-33
    2.4.2 S-100 蛋白的结构与分布  33
    2.4.3 S-100 蛋白的生物学作用及其作用机制  33-34
    2.4.4 S-100 蛋白的应用  34-35
    2.4.5 展望  35-37
第三章山羊卵巢黄体中弥散性神经内分泌细胞的鉴定  37-49
  3.1 材料与方法  37-39
    3.1.1 主要仪器设备及试剂  37
    3.1.2 实验动物与取材  37-38
    3.1.3 免疫组织化学SP 法染色程序  38
    3.1.4 图像分析  38
    3.1.5 数据处理  38-39
  3.2 结果  39-47
  3.3 讨论  47-49
第四章四种弥散性神经内分泌细胞标志物在黄体中的共存  49-63
  4.1 材料方法  49-50
    4.1.1 主要仪器设备及试剂  49
    4.1.2 实验动物与取材  49
    4.1.3 染色操作程序  49-50
    4.1.4 图像分析  50
    4.1.5 数据处理  50
  4.2 结果  50-61
  4.3 讨论  61-63
结论  63-64
参考文献  64-74
致谢  74-75
作者简介  75

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