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新型人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白的成药性研究

作　者: 孙博
导　师: 游松；刘志敏
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 干扰素α2b 人血清白蛋白 药物代谢动力学 免疫原性 抗原性 抗原表位
分类号: R91
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


慢性乙型病毒性肝炎以其发病率高,复发性高,成为目前很难治愈的疾病之一。干扰素a2b对其具有很好的疗效,但由于它在人体内的半衰期短,必须多次大剂量给药才能达到一定的效果,使其临床应用受到限制。本实验是基于目前进入临床Ⅲ期实验的长效干扰素HSA-IFN-α2b (Albuferon)为研究对象,研究发现该融合蛋白有不均一性、不稳定性以及回收率低等分子缺陷,在此基础上对其进行分子结构改造而构建出新型融合蛋白IFN-α2b-HSA (C34S),并对其成药性(药物代谢动力学,免疫原性等)进行了初步研究。本实验通过改变融合蛋白相位和基因点突变等技术构建了新型融合蛋白IFN-α2b-HSA(C34S);通过对新型融合蛋白IFN-α2b-HSA(C34S)和Albuferon融合蛋白HSA-IFN-α2b进行还原与非还原SDS-PAGE电泳比较；考察两种纯化样品在4℃储存条件下的稳定性差异；将新型融合蛋白IFN-α2b-HSA (C34S)进行125I标记,通过对SD大鼠的皮下和静脉注射考察其药代动力学价值；通过对三种品系小鼠(KM、C57、BLAB/C)注射新型融合蛋白IFN-α2b-HSA (C34S)和Albuferon融合蛋白HSA-IFN-α2b,进而从小鼠收集得到相应的抗血清,采用ELISA间接法测抗体技术比较两种抗血清中产生抗体的差异,最终获得两种融合蛋白的免疫原性、抗原性和抗原表位产生等对比结果。结果显示,通过改变融合蛋白相位和基因点突变等技术构建的新型融合蛋白IFN-α2b-HSA (C34S)具有更高的稳定性和均一性；并且新型融合蛋白IFN-α2b-HSA (C34S)具有更低的免疫原性,并消除了Albuferon融合蛋白的一些抗原表位,药代动力学研究的结果为今后的临床研究提供准确的参照标准。最终,本实验成功的构建了新型长效人血清白蛋白和干扰素a2b融合蛋白：IFN-α2b-HSA(C34S),该新型融合蛋白不仅克服了Albuferon融合蛋白稳定性和均一性差的缺陷,而且具有类似的半衰期和更低的免疫原性,摒弃了Albuferon融合蛋白的生产工艺复杂、工艺周期长及采用生产费用高昂的冻干剂型等不利条件,使得液体制剂成为可能,大大降低了生产成本。’较长的半衰期改变了干扰素α2b需要多次反复给药的尴尬局面。最重要的是,该新型融合蛋白还可以避开现有的专利保护,有望开发成为具有自主知识产权的新型长效IFN-α2b。

全文目录


缩略词表  10-11
中文摘要  11-13
Abstract  13-15
第一章 前言  15-18
第二章 实验材料  18-21
  2.1 实验材料  18-19
    2.1.1 菌株  18
    2.1.2 蛋白标准品  18
    2.1.3 融合蛋白  18
    2.1.4 核酸及蛋白分子量标准  18
    2.1.5 酶标抗体  18
    2.1.6 主要仪器  18-19
  2.2 试剂  19-21
    2.2.1 主要试剂  19
    2.2.2 主要溶液  19-21
第三章 实验步骤  21-25
  3.1 融合蛋白稳定性研究  21
    3.1.1 融合蛋白还原和非还原SDS-PAGE电泳检测  21
    3.1.2 融合蛋白SEC检测  21
  3.2 药代动力学研究  21-23
    3.2.1 ~(125)I-IFN-α 2b-HSA(C34S)制备和鉴定  21-22
    3.2.2 ~(125)I-IFN-α 2b-HSA(C34S)的代谢和生物利用度研究  22-23
  3.3 免疫学研究  23-25
    3.3.1 抗原表位预测  23
    3.3.2 融合蛋白动物免疫  23
    3.3.3 ELISA实验  23-25
第四章 实验结果  25-43
  4.1 融合蛋白稳定性研究  25-27
  4.2 药代动力学研究  27-38
    4.2.1 Sephacryl~(TM)S-200凝胶层析分离纯化的~(125)I-IFN-α 2b-HSA(C34S)放射性蛋白图谱  27-28
    4.2.2 ~(125)I-IFN-α 2b—HSA(C34S)的放化纯度及放射比活度  28-29
    4.2.3 SD大鼠皮下或静脉注射~(125)I-IFN-α 2b-HSA(C34S)后血清药物浓度的变化  29-34
    4.2.4 SD大鼠皮下或静脉注射~(125)I-IFN-α 2b-HSA(C34S)后的药代动力学参数  34-38
  4.3 免疫学研究  38-43
    4.3.1 抗原表位预测  38-39
    4.3.2 融合蛋白动物免疫  39-43
第五章 讨论  43-49
结论  49-50
参考文献  50-55
个人简历  55-56
致谢  56

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药物基础科学
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