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传染性法氏囊病毒细胞活疫苗临床前期研究

作　者: 李海斌
导　师: 周继勇
学　校: 浙江大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 鸡传染性法氏囊病病毒 疫苗 标准化 免疫效力 相关性
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一种急性、高度接触传染的免疫抑制性疾病。IBDV主要侵害鸡体的中枢免疫器官—法氏囊,从而增加对其它病原的易感性,严重危害着世界各地养禽业。目前,对该病的控制主要以疫苗免疫为主,但由于最近变异毒株的不断出现,使得经典疫苗不能对该病产生有效的防护作用。因此,开发一种具有良好免疫原性的新疫苗,显得尤为重要。本课题就IBDV NB株疫苗的免疫原性进行研究。将IBDV-NB囊毒和细胞弱毒进行标定,结果显示：IBDV-NB-F7代囊毒的BID50/0.1ml为106.15,对鸡的最小发病剂量为10BID50/0.1ml, IBDV-NB-F7代囊毒无外源病毒和细菌污染。IBDV-NB细胞弱毒F26-38代的毒价为106.243～6.876TCID50/0.1ml,免疫雏鸡后未产生对ND-Lasota疫苗免疫抑制作用(P>0.05)。5×104TCID50/0.1ml免疫接种后未造成法氏囊的显微损伤。IBDV-NB-F38代的转瓶生产最佳工艺为：最佳CEF接种浓度为2×106/ml,最佳接毒剂量为5000倍稀释,最佳收毒时间为120h。一次免疫NB-F38细胞活疫苗株后7天对NB-F7强毒和BC6/85毒株可分别产生50%和25%的保护率,一免后10天可分别产生94.7%和90%的保护率。与商用228E疫苗相比,NB-F38对NB-F7的保护率高于228E、对BC6／85的保护率上与228E相近。二免NB-F38疫苗7天对NB-F7强毒的保护率能达到100%,对BC6／85的保护率为90%。NB-F38疫苗的免疫保护期测定显示,二免后88天能产生对NB-F7 90%的保护率。NB-F38疫苗ELISA抗体检测显示,二免后7天抗体滴度迅速升高,10天达到高峰并持续至免疫后60天。NB-F38疫苗的VP3、VP4抗体检测显示,一免血清中的VP3、VP4抗体以及二免血清中的VP4抗体全部为阴性：二免后7天VP3抗体达到高峰、14天时下降到阳性水平并持续至免疫后60天。NB-F38疫苗免疫后的中和抗体(NA)检测显示,一免后30天达到高峰,之后迅速开始下降,到60天时消失；二免后14天达到高峰,之后逐渐下降,二免后60天还能维持较高的水平。NB-F38疫苗NA与免疫保护力的关系分析显示,NA滴度为869.14可产生对NB-F7的保护作用,但对BC6／85至少NA滴度为1422.33时才能产生保护作用。综合上述,表明,NB-F38疫苗具有优良的免疫保护力。

全文目录


目录  6-10
摘要  10-11
ABSTRACT  11-13
第一部分 文献综述  13-35
  1 IBDV的分类和特点  13-14
    1.1 病毒学分类和形态结构  13-14
    1.2 培养特性  14
    1.3 理化特性  14
  2 IBD的危害  14-16
    2.1 免疫抑制  14-15
    2.2 IBD流行病学  15
    2.3 临床症状及剖检变化  15-16
    2.4 IBD的诊断  16
  3 IBDV基因组结构及编码的蛋白  16-20
    3.1 IBDV基因组结构  16-17
    3.2 病毒的蛋白  17-20
      3.2.1 VP1蛋白  17-18
      3.2.2 VP2蛋白  18-19
      3.2.3 VP3蛋白  19
      3.2.4 VP4蛋白  19-20
      3.2.5 VP5蛋白  20
  4 IBDV的变异  20-22
  5 IBDV疫苗研究进展  22-29
    5.1 疫苗种类  22-25
      5.1.1 IBDV经典毒株疫苗  22-23
      5.1.2 IBDV变异毒株疫苗  23
      5.1.3 IBDV基因工程疫苗  23-25
    5.2 中国市场IBD疫苗现状  25-27
      5.2.1 IBD传统活疫苗  25-27
      5.2.2 IBD灭活疫苗  27
      5.2.3 IBD基因工程疫苗  27
    5.3 免疫程序  27-28
    5.4 免疫途径  28
    5.5 免疫失败的原因  28-29
  参考文献  29-35
第二部分 研究内容  35-80
  第一章 传染性法氏囊病毒强弱毒株的标准化  35-58
    摘要  35
    1 材料  35-36
      1.1 病毒  35-36
        1.1.1 IBDV强毒株  35-36
        1.1.2 IBDV弱毒株  36
      1.2 SPF种蛋及SPF鸡  36
      1.3 疫苗  36
        1.3.1 IBDV疫苗  36
        1.3.2 新城疫疫苗  36
    2 方法  36-40
      2.1 IBDV强毒的标定  36-37
        2.1.1 IBDV-NB-F7囊毒制备  36
        2.1.2 毒价测定  36-37
        2.1.3 最小感染剂量测定  37
        2.1.4 外源病毒检测  37
        2.1.5 无菌检验  37
      2.2 弱毒株的标定  37-40
        2.2.1 IBDV弱毒株的制备  37-38
        2.2.2 无菌检验  38
        2.2.3 外源病毒检测  38-39
        2.2.4 免疫干扰试验  39
        2.2.5 安全性检验  39-40
        2.2.6 IBDV-NB的转瓶生产优化  40
    3 结果  40-55
      3.1 强毒株的标定  40-48
        3.1.1 IBDV强毒的制备  40-42
        3.1.2 BID_(50)测定  42
        3.1.3 最小感染剂量测定  42-48
        3.1.4 外源病毒检测  48
        3.1.5 无菌检验  48
      3.2 弱毒株的标定  48-55
        3.2.1 IBDV弱毒株的制备  48-49
        3.2.2 无菌检验  49
        3.2.3 外源病毒检测  49
        3.2.4 免疫干扰试验  49-50
        3.2.5 安全性检验  50-54
        3.2.6 IBDV-NB的转瓶生产优化  54-55
    4 讨论  55-56
    参考文献  56-58
  第二章 传染性法氏囊病毒NB株细胞弱毒的免疫力研究  58-80
    摘要  58-59
    1 材料  59-60
      I.1 弱毒活疫苗  59
      1.2 IBDV强毒  59
      1.3 SPF种蛋及SPF鸡  59
      1.4 IBDV高免血清  59
      1.5 传染性法氏囊病毒抗体检测试剂盒  59
      1.6 VP3、VP4蛋白  59-60
      1.7 HRP标记羊抗鸡IGG  60
    2 方法  60-63
      2.1 免疫效力实验设计  60
      2.2 抗体消长规律的测定  60-63
        2.2.1 固定病毒-稀释血清法测定中和抗体  61
        2.2.2 ELISA抗体检测  61-62
        2.2.3 用ELISA法测定VP3、VP4抗体动态变化  62-63
    3 结果  63-78
      3.1 NB株细胞适应毒一次免疫的免疫保护  63-71
        3.1.1 免疫后7天  63-66
        3.1.2 免疫后10天  66-68
        3.1.3 免疫后14天  68-69
        3.1.4 免疫后95天  69-71
      3.2 NB株细胞适应毒两次免疫的免疫保护  71-73
        3.2.1 二免后7天  71-72
        3.2.2 二免后88天  72-73
      3.3 病理保护率  73-74
      3.4 抗体消长规律  74-78
        3.4.1 中和抗体(NA)消长规律  74-75
        3.4.2 酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体消长规律  75-76
        3.4.3 中和抗体与ELISA抗体的相关性研究  76
        3.4.4 VP3、VP4抗体动态变化  76-78
    4 讨论  78-79
    参考文献  79-80
第三部分 附录  80-94
  附录A 抗体效价原始数据  80-85
  附录B 常用试剂和仪器  85-86
  附录C 常用缓冲液及培养基配方  86-93
  附录D 攻读硕士期间研究成果  93-94
致谢  94

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 血清学
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