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表没食子儿茶素没食子酸酯对急性酒精中毒小鼠乙醇吸收的影响及其可能机制

作　者: 王玲
导　师: 姜玲；魏伟
学　校: 安徽医科大学
专　业: 药理学
关键词: 表没食子儿茶素没食子酸酯急性酒精中毒自主活动 Morris 水迷宫转棒实验乙醇脱氢酶 P-gp
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

茶叶中富含多酚类化合物、嘌呤类生物碱、多种维生素和氨基酸类物质,中国历代医学文献多处记载茶可以解酒毒。有研究表明茶叶提取物具有醒酒作用。表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是茶多酚的主要药理活性成分之一,但EGCG对急性酒精中毒的作用目前尚未见报道。本研究采用56%(v/v)二锅头5g/kg ig.小鼠建立急性酒精中毒模型,观察EGCG对急性酒精中毒小鼠的神经行为学指标(自主活动测试、转棒测试、Morris 水迷宫)、血醇浓度的影响,并检测小鼠肝及胃中的乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)活性及肝和回肠段P-gp的表达,探讨EGCG对乙醇吸收影响的可能机制,为揭示乙醇吸收的新机制提供新依据。目的:建立急性酒精中毒小鼠模型,并初步探讨EGCG对急性酒精中毒小鼠的神经行为学指标、血醇浓度的影响及其可能作用机制。方法:将小鼠随机分为正常组、模型组、EGCG 25mg/kg组、EGCG 75 mg/kg组、EGCG 225 mg/kg组、葛根胶囊组(180 mg/kg),正常组和模型组分别给予生理盐水,给药组ig.给予不同浓度药物0.5h后,模型组及给药组以5g/kg ig.给予56%(v/v)二锅头建立小鼠急性酒精中毒模型,以自主活动、Morris水迷宫、转棒测试考察EGCG对急性酒精中毒小鼠的作用;顶空气相色谱法检测血醇浓度;紫外分光光度法检测肝匀浆及胃匀浆中的蛋白浓度和乙醇脱氢酶的活性;Western blot法检测肝及回肠段的P-gp含量表达。结果:1.与正常组比较,模型组小鼠自主活动次数显著增加,与模型组比,EGCG (75、225 mg/kg组)在0.25~1h时自主活动次数降低,其中EGCG 225 mg/kg组1h时,自主活动次数显著降低(P<0.01)。EGCG 225 mg/kg组和葛根胶囊组均具有显著缓解乙醇所致小鼠空间辨别障碍的作用(P<0.01)。EGCG (75、225 mg/kg组)及葛根胶囊组在0.75~2h时能显著缓解乙醇所致小鼠平衡失调现象,差异具有显著性(P<0.01)。2.与模型组相比,EGCG(75、225 mg/kg组)在0.5-1h时血醇浓度降低,差异有显著性(P<0.05),尤其是EGCG 225 mg/kg组的血醇浓度在1h时与模型组比较差异具有显著性(P<0.01)。与正常组比较,模型组小鼠肝和胃中的ADH活性降低,差异具有显著性(P<0.05),在0.25h~2h时EGCG 75mg/kg、225 mg/kg组肝中ADH活性显著增强,尤其是EGCG 225 mg/kg组肝中ADH活性显著增强(P<0.01),EGCG 75 mg/kg组和225 mg/kg组小鼠在0.25h~2h时胃中ADH活性显著增强,差异具有显著性(P<0.01),提示EGCG可能通过增强肝和胃中ADH活性,提高乙醇的分解程度,达到降低血液中乙醇浓度的作用。3.与正常组比较,模型组小鼠肝和回肠段中P-gp的表达增加,差异具有显著性。与模型组相比,1h时EGCG三个剂量组小鼠肝中P-gp的表达降低,差异有显著性, 1h时EGCG 25 mg/kg组和75 mg/kg组小鼠回肠段中P-gp的表达降低,差异有显著性(P<0.01),2h时EGCG 25 mg/kg组和75 mg/kg组小鼠肝和回肠段中P-gp的表达降低,差异具有显著性。提示乙醇可能具有促进肝和回肠段中P-gp表达的作用,则EGCG可能具有抑制肝和回肠段中P-gp表达的作用。结论:1. EGCG可能具有抑制乙醇所致小鼠中枢神经系统兴奋性增加、改善乙醇所致小鼠空间辨别障碍及平衡失调的作用;2. EGCG影响乙醇吸收的机制可能是通过增强肝和胃中的ADH活性,增强乙醇的首过代谢,减少乙醇进入血液,降低血醇浓度,改善急性酒精中毒出现的神经行为学症状;3.乙醇可能具有增强肝和回肠段中的P-gp表达的作用,而EGCG可能具有抑制肝和回肠段中P-gp表达的作用。

全文目录

英文缩略词表  7-9
中文摘要  9-12
英文摘要  12-15
1 前言  15-18
2 实验材料  18-21
  2.1 动物  18
  2.2 药物与试剂  18-20
  2.3 仪器和设备  20-21
3 实验方法  21-29
  3.1 小鼠急性酒精中毒模型的建立及给药方法  21
  3.2 自主活动的检测  21
  3.3 Morris 水迷宫测试  21-22
    3.3.1 定位航行实验  21-22
    3.3.2 空间搜索实验  22
  3.4 转棒测试  22
  3.5 气相色谱法检测血醇浓度  22-24
    3.5.1 色谱条件  22
    3.5.2 正丁醇内标液和乙醇标准液的配制  22-23
      3.5.2.1 正丁醇内标溶液的配制  22-23
      3.5.2.2 乙醇标准液的配制  23
    3.5.3 乙醇浓度标准曲线的建立  23
    3.5.4 精密度实验和回收率实验  23-24
    3.5.5 最低检测浓度测定  24
    3.5.6 血液样品处理  24
  3.6 肝及胃中乙醇脱氢酶(ADH)活性检测  24-25
    3.6.1 10%组织匀浆蛋白含量的检测  24-25
    3.6.2 肝及胃中ADH活性检测  25
  3.7 Western blot 检测肝及回肠段P-糖蛋白(P-gp)的表达  25-28
    3.7.1 肝及回肠段组织蛋白的提取  25-26
    3.7.2 蛋白定量  26
    3.7.3 Western blot 操作步骤  26-28
  3.8 数据处理  28-29
4 实验结果  29-42
  4.1 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对乙醇所致小鼠自主活动增加的影响  29
  4.2 EGCG 对乙醇所致小鼠空间辨别障碍的影响  29-34
    4.2.1 定位航行实验  29
    4.2.2 空间搜索实验  29-34
  4.3 EGCG 对乙醇所致小鼠平衡失调的影响  34
  4.4 EGCG 对血醇浓度的影响  34
  4.5 EGCG 对乙醇小鼠肝及胃中ADH 活性的影响  34-37
    4.5.1 EGCG 对乙醇小鼠肝中ADH 活性的影响  34-37
    4.5.2 EGCG 对乙醇小鼠胃中ADH 活性的影响  37
  4.6 EGCG 对乙醇小鼠肝及回肠段P-gp 表达的影响  37-42
    4.6.1 EGCG 对乙醇小鼠肝中P-gp 表达的影响  37-40
    4.6.2 EGCG 对乙醇小鼠回肠段P-gp 表达的影响  40-42
5 讨论  42-45
  5.1 EGCG 能显著改善乙醇所致的小鼠神经行为学改变  42-43
  5.2 EGCG 可能通过增强肝和胃中ADH 活性而降低血醇浓度减少乙醇对小鼠的作用  43-44
  5.3 乙醇及EGCG 对肝和回肠段P-gp 表达的可能作用  44-45
6 结论  45
7 本研究的不足及今后工作展望  45-46
参考文献  46-49
附录  49-50
致谢  50-52
综述酒精性肝病动物模型的研究进展  52-74

表没食子儿茶素没食子酸酯对急性酒精中毒小鼠乙醇吸收的影响及其可能机制

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