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欧前胡素和异欧前胡素在大鼠体内的药代动力学研究

作　者: 张娟
导　师: 王巧
学　校: 河北医科大学
专　业: 药物分析学
关键词: 欧前胡素异欧前胡素 HF-LPME 药代动力学研究 HPLC-MS
分类号: R969.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

欧前胡素和异欧前胡素属于6,7-呋喃香豆素类化合物，因取代基位置不同互为位置异构体。二者广泛存在于植物界，尤其在伞形科中药中含量丰富，均具有镇痛、抗病毒、抗肿瘤、抗菌和抗HIV等药理作用。此外，欧前胡素和异欧前胡素对药物代谢酶-细胞色素酶P450和谷胱甘肽S-转移酶的活性有一定的影响。中药成分复杂，各成分的体内过程可能存在相互影响，对可影响药物代谢酶活性的成分的药代动力学研究显得尤为重要。目前对于欧前胡素和异欧前胡素的药代动力学研究，多是将其作为药材整体药动学研究中的化合物进行，尚未有二者单体药代动力学的系统研究。本研究以专属、灵敏的高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）技术为分析手段，分别建立了各种生物样品中欧前胡素和异欧前胡素及其代谢物的定量测定方法，并用于二者分别灌胃大鼠后的药代动力学研究和比较，为中药整体药动学的阐明奠定了基础，为中药位置异构体药动学规律的寻找提供了借鉴。第一部分欧前胡素的药代动力学研究目的：1优化中空纤维液液微萃取（HF-LPME）条件，用于大鼠血浆、中欧前胡素及其代谢物花椒毒酚测定的样品前处理；2建立血浆中欧前胡素及其代谢物花椒毒酚测定的HPLC-MS方法，研究大鼠灌胃欧前胡素后的药代动力学特征；3建立尿液和胆汁中欧前胡素及其代谢物花椒毒酚和花椒毒素测定的HPLC-MS方法，研究大鼠灌胃欧前胡素后的排泄动力学特征。方法：1以空白大鼠血浆和待测化合物对照品制备模拟生物样本，按照单因素考察的方法依次考察并确定提取溶剂、中空纤维长度、搅拌速率、提取温度、稀释倍数和盐效应等提取条件，确定提取欧前胡素及其代谢物的最佳条件。Electrospray Ionization （ESI）源，源喷射电压：5500V；正离子模式监测；离子源温度（TEM）：650℃；欧前胡素、与花椒毒酚检测离子对和DP电压、CE电压分别为271.1/203.2，25V，15eV和203.2/147.1，20V，32eV。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18，流动相体系为甲醇-1mmol/L NH4Ac，梯度洗脱，流速0.8mL/min；2结合本实验室对欧前胡素体内定性研究的结果进行实验，确定测定化合物。灌胃给予大鼠欧前胡素后采集不同时间点的大鼠血浆，采用已确定的HF-LPME处理血浆样本。采用HPLC-MS方法测定。采用Electrospray Ionization（ESI）源，正离子模式监测。源喷射电压（IS）：5500V；离子源温度：500℃；雾化气（Gas1）：40psi，加热气（Gas2）：50psi，帘气：25psi；以东莨菪内酯为内标，采用Agilent Zorbax SB-C18柱进行分离，流动相体系为甲醇-1mmol/L NH4Ac，梯度洗脱，流速0.8mL/min。36只大鼠灌胃给予欧前胡素后置于代谢笼内，收集72小时内0-4，4-8，8-12，12-24，24-36，36-48，48-60和60-72h的尿液并记录体积，采用与血浆样品相同的HF-LPME预处理方法，另外6只大鼠麻醉后进行胆管插管手术，收集24小时内0-2，2-4，4-8，8-12，12-20和20-24h时间段的胆汁并记录体积，用乙酸乙酯萃取的方式进行预处理。尿液和胆汁样品均在电喷雾离子（ESI）源，正离子多反应监测模式（MRM）下进行检测。欧前胡素、花椒毒酚、花椒毒素和内标的检测离子对和DP电压、CE电压分别为271.1/203.2，25V，15eV、203.2/147.1，20V，32eV、217.2/202.0，10V，25eV和193.1/133.1，49V，25eV，8-甲氧基5-羟基补骨脂素的检测离子对和DP电压、CE电压为193.1/133.1，49V，25eV。色谱分离采用AgilentZorbax SB-C18色谱柱（150mm×4.6mm，5m），柱温：25℃；流动相为甲醇（A）和1mmol/L乙酸铵-水（B），梯度洗脱，洗脱程序如下：0~5min，从50%A线性变化至95%A；5-8.5min，保持95%A；流速：0.8mL/min，进样量10μL。结果：1经过考察确定的提取条件为：以正庚醇为萃取溶剂，中空纤维长度为5cm，磁力搅拌器的转速为675rpm，萃取温度为室温，100μL血浆用2%NaCl稀释至1.5mL，萃取时间为50min；2实验得到欧前胡素和花椒毒酚的药动学参数和药-时曲线。灌胃给予大鼠欧前胡素以后吸收迅速，在1.01h达到最大浓度，T1/2为7.93，K为0.079（1/h），说明欧前胡素消除亦较快。灌胃5min以后即检测到代谢物花椒毒酚，说明欧前胡素被吸收以后迅速被转化为代谢物花椒毒酚；3大鼠灌胃给予欧前胡素后，欧前胡素在尿中45h内基本排泄完全，在胆汁中16h内基本排泄完全。欧前胡素以原型、花椒毒酚和花椒毒素的形式在尿液中的排泄量分别为13.46%，5.296%，和0.1686%；在胆汁中的排泄量分别为0.1214%，0.04282%和0.009042%。表明欧前胡素以原型在大鼠尿液和胆汁中排泄率不高。结论：建立了一种环保、灵敏度高、专属性强的HPLC-MS法测定大鼠血浆、尿液和胆汁中的欧前胡素及其代谢物。欧前胡素在大鼠体内吸收迅速，主要经尿液排泄。第二部分异欧前胡素的药代动力学研究目的：1建立大鼠血浆中异欧前胡素及其代谢物花椒毒酚的HPLC-MS测定方法，并研究大鼠灌胃给予异欧前胡素后的药代动力学特征；2建立大鼠尿液和胆汁中异欧前胡素及其代谢物花椒毒酚和花椒毒素的HPLC-MS测定方法，并研究大鼠灌胃给予异欧前胡素后的排泄动力学特征。方法：1将异欧前胡素混悬在于CMC-Na的灌胃液给予大鼠后，在不同时间点对大鼠进行眼内眦取血，得到血浆生物样本，采用HF-LPME的预处理方法，采用与第一部分血浆测定相同的液相和质谱条件下进行检测；26只SD大鼠灌胃给予异欧前胡素后置于代谢笼内饲养，自由饮水，4h后给予食物，分别收集0-4，4-8，8-12，12-24，24-36，36-48，48-60和60-72h时间段的尿液并记录体积，之后采用与第一部分尿液处理相同的方法进行预处理。另取6只大鼠给药后，以20%乌拉坦麻醉（7mL/kg），进行胆管插管术，收集给药后0-2，2-4，4-8，8-12，12-20和20-24h时间段的胆汁并记录体积，收集的样本使用乙酸乙酯萃取的方法进行预处理，采用第一部分排泄动力学部分的液相和质谱条件下进行检测。结果:1实验结果显示异欧前胡素吸收迅速，计算得到异欧前胡素的T1/2为2.78h，K为0.249（1/h）说明异欧前胡素在大鼠体内消除较快；2在尿液中，72h内异欧前胡素原型在45h内基本排泄完全，代谢物则在56h内基本排泄完全，异欧前胡素分别以原型和代谢物形式排泄量约占总给药量的17.80%和12.34%。而在胆汁中，异欧前胡素以原型形式在12h内基本排泄完全，而代谢物经15h基本排泄完全，两种形式排泄量分别约占总给药量的2.150%和0.0820%。结论：异欧前胡素和欧前胡素在大鼠体内的T1/2、Cmax、Tmax和K无统计学上的差异，二者都吸收迅速，消除较快；在相同给药量的前提下，异欧前胡素有更高的生物利用度；在尿液和胆汁中异欧前胡素以原型排泄的比率更高，说明欧前胡素较异欧前胡素更容易转化为代谢物。

全文目录

摘要  5-9
ABSTRACT  9-13
引言  13-14
第一部分欧前胡素的药代动力学研究  14-52
  前言  14-15
  一血浆中欧前胡素及其代谢物中空纤维液液微萃取条件的研究  15-20
    材料与方法  15-17
    结果  17-20
  二欧前胡素在大鼠血浆中的药动学研究  20-24
    材料与方法  20-23
    结果  23-24
  三欧前胡素在大鼠尿液和胆汁中的排泄动力学研究  24-30
    材料与方法  24-28
    结果  28-30
  附图  30-41
  附表  41-49
  讨论  49-50
  小结  50
  参考文献  50-52
第二部分异欧前胡素在大鼠体内的药代动力学研究  52-82
  前言  52-53
  一异欧前胡素在大鼠血浆中的药动学研究  53-57
    材料与方法  53-55
    结果  55-57
  二异欧前胡素在大鼠尿液和胆汁中的排泄动力学研究  57-61
    材料与方法  57-58
    结果  58-61
  附图  61-70
  附表  70-78
  讨论  78-79
  小结  79-80
  参考文献  80-82
结论  82-83
综述欧前胡素与异欧前胡素的药效学和药代动力学研究进展  83-90
  参考文献  87-90
致谢  90-91
个人简历  91-92

欧前胡素和异欧前胡素在大鼠体内的药代动力学研究

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