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5-氮杂胞苷和曲古抑菌素A对HaCaT细胞MMP-1和MMP-3表达的影响

作　者: 赵荣欣
导　师: 黄进华
学　校: 中南大学
专　业: 临床医学
关键词: HaCaT细胞 基质金属蛋白-1 基质金属蛋白-3 5-氮杂胞苷 曲古抑菌素A
分类号: R758.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


背景：光老化指皮肤由于反复光暴露引起的提前老化,其特征性组织学变化是弹性组织变性物质的沉积和胶原的嗜碱性变性,伴有Ⅰ型和Ⅲ型前胶原的降解。虽然其发生机制尚未完全明了,但是基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases, MMPs)增高导致纤维结缔组织的降解是引起皮肤光老化最重要的机制。在皮肤光老化的发生发展以及当前的诸多研究中,认为最重要的是基质金属蛋白酶是MMP-1和MMP-3,也是目前的研究热点。目的：(1)探讨HaCaT细胞MMP-1和MMP-3的表达是否受DNA甲基化的调控；(2)探讨HaCaT细胞MMP-1和MMP-3的表达是否受组蛋白乙酰化的调控；(3)探讨HaCaT细胞MMP-1和MMP-3的表达是否受DNA甲基化和组蛋白乙酰化协同作用的调控,为进一步研究皮肤光老化的表观遗传学机制,提供理论依据。方法：(1)体外常规培养人角质形成细胞株(HaCaT细胞)；(2)用5-氮杂胞苷(5-azaC)(1μmol/L)或/和曲古抑菌素A(TSA)(1μmol/L)处理HaCaT细胞；分为：5-azaC处理组、TSA处理组和5-azaC联合TSA处理组,分别作用于HaCaT细胞0h、24h、48h、72h后提取上清和mRNA;(3)用Real-tinme PCR和ELISA方法分别从mRNA及蛋白的水平检测不同药物处理组HaCaT细胞中MMP-1/3基因的表达。结果：(1)用5-azaC(1μmol/L)处理HaCaT细胞24h、48h、72h后,与Oh(空白对照组)作比较,HaCaT细胞MMP-1和MMP-3mRNA水平和蛋白表达均显著升高(P<0.05)；(2)用TSA(1μmol/L)处理HaCaT细胞24h、48h、72h后,与0h(空白对照组)作比较,HaCaT细胞MMP-1和MMP-3mRNA水平和蛋白表达均显著升高(P<0.05)：(3)用5-azaC (1μmol/L)联合TSA (1μmol/L)处理24h、48h、72h后,与Oh(空白对照组)作比较,HaCaT细胞MMP-1和MMP-3mRNA水平和蛋白表达均显著升高(P<0.05)；且与单用5-azaC或TSA处理后的不同时间点比较,24h、48h、72h的HaCaT细胞MMP-1、MMP-3mRNA水平和蛋白表达均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：(1) HaCaT细胞MMP-1和MMP-3的表达受DNA甲基化和组蛋白乙酰化的调控：(2)DNA甲基化和组蛋白乙酰化对HaCaT细胞MMP-1和MMP-3的表达具有协同作用。图15幅,表7个,参考文献35篇。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
符号说明  9-10
1 前言  10-13
2 材料与方法  13-22
  2.1 实验材料  13-16
    2.1.1 实验用细胞株  13
    2.1.2 主要试剂及试剂盒  13
    2.1.3 主要仪器设备  13-14
    2.1.4 实验中所用的培养基及试剂配制  14-16
  2.2 方法  16-22
    2.2.1 HaCaT细胞复苏  16
    2.2.2 细胞传代  16
    2.2.3 细胞计数  16
    2.2.4 细胞冻存  16-17
    2.2.5 目的细胞种板  17
    2.2.6 药物处理及分组  17
    2.2.7 细胞总RNA提取及Real time PCR检测  17-19
    2.2.8 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MMP-1及MMP-3  19-21
    2.2.9 统计学方法分析  21-22
3 结果  22-35
  3.1 观察HaCaT细胞在不同药物处理组作用下细胞的生长状态  22-24
  3.2 5-azaC处理组、TSA处理组、5-azaC联合TSA处理组分别作用于HaCaT细胞0h、24h、48h、72h时提取mRNA,用Real-time PCR检测HaCaT细胞MMP1和MMP3mRNA表达水平  24-30
  3.3 5-azaC处理组-、TSA处理组、5azaC联合TSA处理组分别作用于HaCaT细胞0h、24h、48h、72h吋提取上清，用ELISA检测HaCaT细胞MMP-1和MMP-3蛋白表达水平  30-35
4 讨论  35-39
5 结论  39-40
参考文献  40-43
综述1  43-49
  参考文献  46-49
综述2  49-56
  参考文献  54-56
攻读学位期间的主要成绩  56-57
致谢  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 皮肤病学与性病学 > 皮肤病学 > 物理性皮肤病
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