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应用HRM法检测结直肠癌患者KRAS和EGFR基因突变

作　者: 尹苹
导　师: 徐克前
学　校: 中南大学
专　业: 临床医学
关键词: 高分辨率熔解曲线 KRAS基因 EGFR基因结直肠癌
分类号: R735.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 11次
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内容摘要

目的：研究高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析法检测结直肠癌患者DNA中KRAS基因和EGFR基因突变,建立一种简单、可靠的检测KRAS和EGFR基因型方法。方法：收集在中南大学湘雅医院和湖南省肿瘤医院2012年9月至2012年12月病理学确诊为结直肠癌患者血标本70例。提取患者血样本中的基因组DNA,设计PCR引物并扩增目的基因片段,用HRM法检测结直肠癌KRAS基因2号和3号外显子、EGFR基因19和21号外显子的突变,同时采用Sanger测序法验证HRM法的准确性,并通过双侧χ2检验分析两种方法之间的差异性。结果：在70例样本中,用HRM法检测KRAS基因2号外显子有18例突变,分别为G12D(6例)、G12C(9例)、G12V(3例),通过测序法检测KRAS基因2号外显子有17例突变；KRAS基因3号外显子未发生突变、EGFR基因19号外显子有3例突变、EGFR基因21号外显子未发生突变。利用统计学软件SPSS16.0分析得出两种检测方法之间并没有显著性差异。结论：高分辨率熔解曲线分析法进行基因分型与测序法检测的结果基本相同,HRM法还具有高的分辨率、准确度、灵敏度等特点,与测序法相比,HRM法操作更简单、结果容易读取、更能节约检测时间和检测成本,因此适合在临床推广应用。

全文目录

摘要  4-5
英文摘要  5-8
符号说明  8-9
前言  9-12
1 材料和方法  12-17
  1.1 材料  12-14
    1.1.1 实验材料  12
    1.1.2 主要试剂  12-13
    1.1.3 主要仪器  13
    1.1.4 PCR引物设计及合成  13-14
  1.2 方法  14-17
    1.2.1 标本收集  14
    1.2.2 基因组DNA的提取  14
    1.2.3 琼脂糖凝胶电泳鉴定基因组DNA  14
    1.2.4 基因组DNA纯度和浓度的鉴定  14-15
    1.2.5 PCR扩增  15
    1.2.6 PCR产物回收  15-16
    1.2.7 测序验证  16
    1.2.8 HRM法检测KRAS及EGFR基因突变  16
    1.2.9 统计学分析  16-17
2 结果  17-25
  2.1 KRAS与EGFR基因单重PCR扩增结果  17-19
  2.2 高分辨率溶解曲线检测结果  19-24
    2.2.1 KRAS基因2号外显子高分辨率溶解曲线以及测序结果  19-20
    2.2.2 KRAS基因3号外显子高分辨率溶解曲线以及测序结果  20-22
    2.2.3 EGFR基因19号外显子高分辨率溶解曲线以及测序结果  22-23
    2.2.4 EGFR基因21号外显子高分辨率溶解曲线以及测序结果  23-24
  2.3 统计学结果  24-25
3 讨论  25-27
4 结论  27-28
参考文献  28-31
综述  31-42
  参考文献  38-42
攻读学位期间主要的研究成果  42-43
致谢  43

应用HRM法检测结直肠癌患者KRAS和EGFR基因突变

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