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氯喹抑制放射诱导的自噬对食管癌细胞放射敏感性影响的研究

作　者: 袁晓丽
导　师: 李涛
学　校: 泸州医学院
专　业: 肿瘤学
关键词: 氯喹自噬食管癌放射敏感性
分类号: R735.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：本研究探讨氯喹（Chloroquine，CQ）抑制放射诱导的自噬对食管癌TE-1细胞放射敏感性的影响及其主要机制。方法：采用MTT法检测不同浓度CQ对TE-1细胞的生长抑制作用，计算CQ的IC10、IC50，后续试验选取IC10作为CQ作用浓度。实验分不同照射剂量组、不同加药顺序联合照射组，于照射后不同时间，用Western-blot测定TE-1细胞自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达。用Lyso-Tracker Red DND-99/Hochest33258荧光染色，荧光显微镜观察细胞内酸性囊泡（Acidic vesicle organelles, AVOs）的变化。Annexin-V/PI双染色法用流式细胞仪（Flow Cytometer, FCM）检测细胞经不同处理6h、24h后的早期凋亡率。采用克隆形成分析法测定不同CQ加药顺序对TE-1细胞放射敏感性的影响，并用单击多靶数学模型[SF=1-(1-e-D/Do)N]和线性二次函数模型[SF=e^(-αD-βD2)]拟合剂量-生存曲线，计算出D0、Dq、SF2、放射增敏比（SERD0）和α、β、α/β等放射生物学参数。结果：不同浓度CQ作用于食管癌TE-1细胞48h后，随CQ浓度增加，细胞存活率逐渐减低，呈浓度依赖性。IC10和IC50分别为15.416±3.327μmol/L和72.332±5.277μmol/L。后续实验选择低毒性浓度15μmol/L作为CQ作用浓度。Western-blot显示，放射线可诱导TE-1细胞自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达并促进LC3-I转换为LC3-II，在照射后6h达到高峰；荧光染色显示，放射线显著诱导TE-1细胞内酸性囊泡的形成，随照射剂量增加，酸性囊泡体积明显增加，并出现融合，细胞内荧光强度明显增加，在照射后6h和12h变化明显。照射前后加入CQ作用于TE-1细胞后，与单纯照射组（RT）、照射前使用CQ组（Pre-CQ）相比，照射后使用CQ组（Post-CQ）显著下调放射线诱导的自噬相关蛋白Beclin-1的表达和LC3-I向LC3-II转换，照射后6h、12h变化明显，差异具有统计学意义（P<0.05）。同时减小了酸性囊泡体积、细胞内荧光弥散、荧光强度减弱，差异具有统计学意义（P<0.0001）。FCM显示，在照射后24h，随着照射剂量增加，细胞早期凋亡率逐渐增加，差异具有统计学意义（P<0.0001）；而在照射后6h，不同剂量组早期凋亡率差异无统计学意义（P=0.8489）。在照射后24h，照射后使用CQ（2Gy+CQ）组显著增加细胞早期凋亡率，差异具有统计学意义（P<0.05）；而在照射后6h，不同CQ加药顺序联合照射对TE-1细胞早期凋亡率的差异无统计学意义（P>0.05）。克隆形成实验：单纯照射（RT）组D0值为1.9964Gy，Dq值为0.5533Gy，N值为1.8930，SF2值为0.5795，α值为0.1537，β值为0.0491，α/β值为3.1284。照射前使用CQ组（Pre-CQ）D0值为1.9260Gy，Dq值为0.5285Gy，N值为1.8810，SF2值为0.5604，放射增敏比SERD0值为1.0366，α值为0.1605，β值为0.0532，α/β值为3.0688。照射后使用CQ组（Post-CQ）D0值为1.3872Gy，Dq值为0.2040Gy，N值为1.4030，SF2值为0.3152，放射增敏比SERD0值为1.4392，α值为0.4061，β值为0.0638，α/β值为6.3652。结论：放射线可诱导食管癌TE-1细胞自噬活性增加及早期凋亡率增加。放射后使用CQ可明显增加食管癌TE-1细胞的放射敏感性，其机制可能与抑制放射线诱导的自噬并增加早期凋亡相关。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-10
前言  10-16
材料与方法  16-33
结果  33-44
讨论  44-50
结论  50-51
参考文献  51-58
英汉缩略词对照表  58-59
致谢  59-60
综述  60-74
  参考文献  69-74

氯喹抑制放射诱导的自噬对食管癌细胞放射敏感性影响的研究

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