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CIK细胞与DC共培养抗B细胞淋巴瘤作用研究

作　者: 刘小兰
导　师: 苏丽萍
学　校: 山西医科大学
专　业: 内科学
关键词: dendritic cell cytokine induced killer cell non-Hodgkin’s Lymphoma adoptivecellular immunotherapy
分类号: R733.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的恶性淋巴瘤(Malignant Lymphoma, ML)是起源于淋巴结及淋巴组织的一组高度异质性、具有侵袭性的造血系统恶性肿瘤,其发病率有逐年上升趋势。近年来,随着新药尤其是靶向药物的不断问世,恶性淋巴瘤的治疗水平有了长足的进步,部分病种的完全缓解(complete remission; CR)率已达50%-70%,甚至更高,但最终仅有部分患者可获得长期无病生存,而相当比例的患者疾病复发,其主要原因为微小残留病灶的存在。过继细胞免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy, ACI)是向肿瘤患者输注自体或异体具有抗肿瘤活性,能直接或间接发挥抗肿瘤效应的免疫细胞,对体内残存肿瘤细胞具有更直接更有效的杀灭作用,从而达到消灭肿瘤细胞、阻止肿瘤转移和复发的作用。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell, CIK)是体外经抗CD3单抗、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)等细胞因子联合作用产生的一类具有较强抗肿瘤活性和非MHC限制杀瘤特点的T淋巴细胞。树突状细胞(dendritic cell, DC)是目前认为功能最强的抗原体提呈细胞,能有效的将肿瘤抗原提呈给T淋巴细胞,在肿瘤细胞与T细胞间起到桥梁作用。多项研究提示,CIK细胞与DC共培养后表现出更强的杀瘤作用,并在多种肿瘤领域获得较好的效果,但其临床应用主要集中于自体DC-CIK细胞免疫治疗,且CIK细胞与DC共培养细胞对B-NHL体外杀伤作用研究很少。本研究一方面观察健康人群CIK细胞与DC混合培养过程中细胞数量、细胞免疫表型、细胞因子分泌水平及对Raji细胞杀伤活性的变化,以单纯CIK细胞抗肿瘤作用相比较,以求进一步证实CIK细胞与DC共培养后,其增殖活性和杀伤活性显著提高；另一方面,比较健康人群与B-NHL患者DC-CIK细胞培养第15d时细胞数量、细胞免疫表型、细胞因子分泌水平及对Raji细胞杀伤活性明确两者之间的差异；在此基础上,进一步探讨健康人群DC-CIK细胞对不同B-NHL细胞的杀伤活性。为异体DC-CIK细胞免疫治疗更好的应用于临床做准备。方法1.抽取健康志愿者或B-NHL患者外周血50ml,常规单个核细胞提取法分离提取单个核细胞,于37℃、5%C02、饱和湿度培养箱中孵育2h；收集贴壁细胞用于诱导培养DC,非贴壁细胞诱导培养CIK细胞,分别培养9d；将成熟DC与CIK细胞混合培养6d,以单纯CIK细胞作为对照组。2.用倒置显微镜观察细胞形态变化；细胞计数仪采用台盼蓝染色法计数。3.采用流式细胞仪于培养第9d检测DC细胞免疫表型；于第12d、15d检测CIK细胞及DC与CIK细胞共培养细胞免疫表型。4.于培养第15d收集培养细胞上清液,采用ELISA法检测IFN-γ、IL-12和TNF-α细胞因子分泌量。5.采用MTT比色法检测效靶细胞比5：1、10：1、20：1条件下,CIK细胞、DC-CIK细胞对B-NHL细胞的杀伤活性。结果1.CIK细胞与DC共培养后,其增殖活性和杀伤活性显著增强。共培养细胞组CD3+CD8+和CD3+CD56+双阳性细胞比例、细胞因子IFN-γ、 TNF-α、IL-12分泌量均明显高于单纯CIK细胞组,差异有统计学意义。2.健康人群和NHL患者相比,细胞培养第15d DC-CIK细胞数量、CD3+CD8+和CD3+CD56+双阳性细胞比例、细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12分泌量均明显增加。2组细胞对Raji细胞均显示出较强的杀伤活性,在同一效靶比条件下,健康人群组DC-CIK细胞抗肿瘤作用明显优于NHL患者组。3.健康人群DC-CIK细胞对不同B-NHL细胞(SU-DHL4细胞、Raji细胞、KARPAS422细胞)均有较强细胞毒作用,且随效靶比增加杀伤作用增强。结论CIK细胞与DC共培养后,其增殖活性和杀伤活性显著提高。与NHL患者相比,细胞培养第15d健康人群DC-CIK细胞抗肿瘤作用明显增强,且健康人群DC-CIK细胞对不同非霍奇金淋巴瘤细胞均有细胞毒作用。

全文目录


目录  4-5
摘要  5-8
Abstract  8-11
英文缩略词对照  11-13
前言  13-16
1 实验材料  16-17
  1.1 主要仪器  16
  1.2 主要试剂  16-17
  1.3 菌株来源  17
2 实验方法  17-21
  2.1 外周血采集  17
  2.2 单个核细胞分离提取  17-18
  2.3 DC-CIK细胞体外培养  18-19
  2.4 B-NHL细胞体外培养  19
  2.5 检测方法  19-21
3 实验结果  21-31
  3.1 细胞增殖情况  21-24
  3.2 细胞免疫表型分析  24-27
  3.3 细胞因子分泌水平检测  27-28
  3.4 细胞毒作用分析  28-31
4 讨论  31-35
结论  35-36
参考文献  36-40
综述  40-50
  参考文献  46-50
攻读学位期间发表文章情况  50-51
致谢  51-52
个人简介  52

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 网状内皮系统肿瘤
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