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造影剂肾病发病机制中炎性反应的探讨

作　者: 王金艳
导　师: 钟爱民
学　校:
专　业: 内科学
关键词: 造影剂肾病肾小管损伤肾损伤分子 1（KIM-1）核转录因子-κB（NF-κB）肿瘤坏死因子-α（TNF-α）
分类号: R692
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：通过观察TNF-α与NF-κB在CIN模型大鼠肾组织的表达，研究TNF-α、NF-κB与肾小管间质损伤病理评分、KIM-1之间的关系，初步探讨CIN发病中是否存在炎性反应机制。方法：取96只雄性SD大鼠，体重约250-350g之间，随机分成正常对照组（n=48）、CIN模型组(n=48）。模型组从尾静脉注射碘造影剂（76%复方泛影葡胺注射液）10ml/kg，对照组用同样方法给予等量生理盐水。分别在两组大鼠注射后6h、12h、24h、48h、72h、5d、10d、15d时间点各处死6只，留取血液和肾脏标本。血液标本用于检测Scr、BUN水平。对留取的肾组织标本：1、部分甲醛固定，石蜡包埋，病理切片，用于进行肾小管间质损伤的病理评分（HE染色）和观察肾组织KIM-1、、NF-κB、TNF-α因子的蛋白表达（免疫组织化学染色）；2、部分置于RNA保存液，提取组织总RNA，用逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)检测KIM-1、NF-κB、TNF-α的mRNA在肾脏的表达情况。根据对照时间点比较两组大鼠的血清Scr、BUN水平、肾小管间质损伤病理评分和肾组织KIM-1、NF-κB、TNF-α因子和mRNA表达情况，分析肾组织NF-κB、TNF-α因子的表达与肾小管间质损伤病理评分、肾组织KIM-1表达之间的相关关系。结果：1.血清Scr、BUN水平：对照组Scr、BUN各时间点变化不大（p＞0.05）；CIN模型组血Scr、BUN水平造模后12h逐渐升高，峰值出现在48h，显示造模成功。在12h、24h、48h、72h、5d、10d对应时间点，模型组血Scr、BUN水平明显高于对照组（P＜0.05）。2.肾小管间质损伤病理评分：对照组各时间点大鼠肾脏的肾小管未见明显损伤，病理评分无差异（p＞0.05）。CIN模型组6h即见肾小管损伤，24h、48h见肾小管上皮细胞刷状缘脱落、细胞变性坏死及再生，部分肾小管结构受损，髓质区受损最严重，部分肾间质还可见少量炎症细胞浸润及纤维化形成，72h以后肾小管开始逐渐出现修复，15d基本恢复正常。CIN模型组的肾小管间质损伤病理评分显著高于同一时间点的对照组（P＜0.05）。3.免疫组化及RT-PCR结果：KIM-1及KIM-1mRNA在造模后6h后就开始大量表达，在24h达高峰。NF-κB、NF-κBmRNA、TNF-α及TNF-αmRNA亦在造模后6h后就开始表达，48h达高峰。除15d时间点外，模型组KIM-1、NF-κB、TNF-α、KIM-1mRNA、NF-κBmRNA、TNF-αmRNA的表达与对照组对应时间点比较均有显著差异（P＜0.05）。4.NF-κB、TNF-α表达与肾小管间质损伤病理评分、KIM-1表达的相关性：CIN模型组肾小管间质损伤病理评分与NF-κB、TNF-α的蛋白表达正相关，相关系数分别为0.843、0.758（P＜0.05）；与NF-κBmRNA、TNF-αmRNA表达也呈正相关（r=0.743、0.707，P＜0.05）。CIN模型组肾组织的NF-κB、TNF-α蛋白表达与其KIM-1蛋白表达为正相关，相关系数分别为0.863、0.807（P＜0.05）；模型组肾组织NF-κBmRNA、TNF-αmRNA表达与KIM-1mRNA表达也为正相关（r=0.839、0.855，P＜0.05）。结论：1. NF-κB、TNF-α在CIN肾脏中的表达上调。2.CIN肾脏NF-κB、TNF-α的表达水平与肾小管损伤程度相关。3.CIN的发生发展中存在炎性反应机制。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
缩略词索引表  9-10
第1章引言  10-12
第2章材料与方法  12-21
  2.1 实验材料  12-14
    2.1.1 实验仪器及设备  12
    2.1.2 主要试剂  12-13
    2.1.3 主要溶液配置  13-14
    2.1.4 引物合成  14
  2.2 实验方法  14-20
    2.2.1 实验动物分组、造模  14
    2.2.2 标本采集  14-15
    2.2.3 实验流程  15-16
    2.2.4 肾脏组织肾小管间质损伤病理评分(HE 染色)  16
    2.2.5 免疫组化染色  16-18
    2.2.6 RT-PCR  18-20
  2.3 统计学分析  20-21
第3章结果  21-34
  3.1 血 Scr、BUN 检测  21-22
  3.2 肾小管损伤评分  22-23
  3.3 免疫组化染色  23-26
  3.4 RT-PCR  26-29
    3.4.1 RNA 质量鉴定  26
    3.4.2 RT-PCR 结果  26-29
  3.5 Pearson 相关分析  29-34
    3.5.1 CIN 模型组肾小管间质损伤病理评分与肾组织 NF-κB、TNF-α之间的相关性分析  29-30
    3.5.2 CIN 模型组肾小管间质损伤病理评分与肾组织 NF-κBmRNA、TNF-αmRNA 之间的相关性分析  30-32
    3.5.3 CIN 模型组肾组织 KIM-1 表达与 NF-κB、TNF-a 表达之间的相关性分析  32-33
    3.5.4 CIN 模型组肾组织 KIM-1mRNA 表达与 NF-κBmRNA、TNF-amRNA 表达之间的相关性分析  33-34
第4章讨论  34-37
  4.1 造影剂对肾脏的损伤  34-35
  4.2 NF-κB 、TNF-α在 CIN 肾脏中的表达  35-36
  4.3 CIN 中炎性反应机制探讨  36-37
第5章结论和展望  37-38
  5.1 结论  37
  5.2 展望  37-38
致谢  38-40
参考文献  40-43
攻读学位期间的研究成果  43-44
综述  44-55
  参考文献  52-55

造影剂肾病发病机制中炎性反应的探讨

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