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秦皮素抗乳腺癌作用机制及其对免疫的调节作用
作 者: 霍洪楠
导 师: 谢明杰
学 校: 辽宁师范大学
专 业: 微生物学
关键词: 秦皮素 抗乳腺癌 雌激素受体信号通路 免疫调节
分类号: R737.9
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
乳腺癌已成为女性发病率最高的恶性肿瘤,占女性全部恶性肿瘤发病的16.8%。中国人口协会发布的《中国乳腺疾病调查报告》显示:我国城市中乳腺癌的死亡率增长了38.91%,其发病呈年轻化趋势,严重威胁女性健康。雌激素受体(estrogen receptor,ER)介导的信号通路在乳腺癌的发生、发展、浸润和转移过程中发挥着重要作用。雌激素与雌激素受体结合后,不但可以通过基因组信号通路与靶基因上的雌激素反应元件结合,促进靶基因转录,还可以通过非基因组信号通路快速激活下游丝裂原活化蛋白激酶(migoten-activated protein kinases,MAPKs)和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase, PI3K)通路,影响细胞增殖与凋亡。乳腺癌的发生往往伴随着患者免疫系统低下,抗癌药物毒副作用不仅会影响患者免疫系统发挥正常生理功能,而且易产生多药耐药,给乳腺癌治疗带来一定的困难。中药具有毒副作用低、抗癌效果好、调节免疫力等功效,近年来成为研究的热点。香豆素是具有苯并α吡喃酮母核的化合物,具有抗癌、提高免疫力、抗病毒、抗氧化、抗骨质疏松、抗菌、抗心律失常等多种生物活性,药用价值广泛。秦皮素属于简单香豆素类化合物,是中药秦皮的有效成分,因其具有抗肿瘤、抗氧化等多种药理作用是近年来研究的热点。本文以MCF-7细胞为模型,系统的研究了秦皮素抑制MCF-7细胞ERα信号通路的作用机制,以体外分离的小鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞为模型,初步研究了秦皮素对免疫的调节作用。具体研究结果如下:1.采用MTT比色法,检测秦皮素对MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的影响,结果显示,秦皮素以时间和剂量依赖方式抑制乳腺癌细胞的增殖。2.采用划痕法,检测秦皮素对MCF-7细胞迁移能力的影响。结果显示,秦皮素能明显抑制MCF-7细胞的迁移。3.采用MTT比色法和流式细胞仪分析,检测秦皮素对E2促MCF-7细胞增殖和抗凋亡作用的影响。结果显示,E2具有促进MCF-7细胞的增殖和抗细胞凋亡作用,秦皮素能抑制E2促MCF-7细胞增殖和抗细胞凋亡的作用,将E2诱导的MCF-7细胞阻滞在G0/G1期。4.采用Western blot方法,检测秦皮素对MCF-7细胞ERα蛋白、E2诱导的靶基因蛋白cyclin D1、Bcl-2及下游MAPK/Erk1/2和PI3K/Akt信号通路的影响。结果显示,秦皮素能降低ERα的表达量、抑制E2诱导的cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达,对下游非基因组信号通路MAPK/Erk1/2和PI3K/Akt均有一定的抑制作用,其中,对MAPK/Erk1/2信号通路抑制作用更明显,说明MAPK/Erk1/2信号通路是秦皮素抗乳腺癌作用的主要靶点。5.采用尼龙毛柱法分离小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞,利用MTT比色法,分析秦皮素对小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖的影响。结果显示,在一定浓度范围内,秦皮素能促进小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖。6.采用MTT比色法和中性红吞噬法,检测秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活力和吞噬能力的影响。结果显示,秦皮素能提高小鼠腹腔巨噬细胞的代谢活力和吞噬能力。7.采用靶细胞幼生法,检测秦皮素对小鼠NK细胞活性的影响。结果显示,秦皮素能提高小鼠NK细胞的活性。
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全文目录
摘要 4-6 Abstract 6-11 1 引言 11-18 1.1 乳腺癌与 ERα信号通路 11-13 1.1.1 ERα结构与功能 11-12 1.1.2 乳腺癌与 ERα信号通路相关研究 12-13 1.2 免疫调节作用与肿瘤 13-15 1.2.1 肿瘤免疫的相关研究 13-14 1.2.2 中药对机体的抗肿瘤和免疫调节作用 14-15 1.3 香豆素的研究进展 15-17 1.3.1 秦皮素的结构 15-16 1.3.2 秦皮素的生理功能 16-17 1.4 本文研究内容 17-18 1.4.1 秦皮素的抗乳腺癌作用机制研究 17 1.4.2 秦皮素对机体免疫调节的研究 17-18 2 秦皮素的抗乳腺癌作用机制 18-33 2.1 实验材料和仪器 18-21 2.1.1 材料和试剂 18-19 2.1.2 主要仪器 19 2.1.3 主要试剂配制 19-21 2.2 实验方法 21-24 2.2.1 细胞培养 21 2.2.2 MTT 法检测 21-22 2.2.3 蛋白质免疫印迹 22 2.2.4 秦皮素对 MCF-7 细胞和 MDA-MB-231 细胞增殖的影响 22 2.2.5 秦皮素对 MCF-7 细胞迁移的影响 22-23 2.2.6 秦皮素对 E2 促 MCF-7 细胞增殖的影响 23 2.2.7 秦皮素对 E2 诱导的 MCF-7 细胞周期分布和凋亡的影响 23 2.2.8 秦皮素对 MCF-7 细胞 ERα蛋白表达的影响 23 2.2.9 秦皮素对 E2 诱导的 cyclin D1 和 Bcl-2 表达的影响 23 2.2.10 秦皮素对 E2 诱导的 MAPK/Erk1/2 和 PI3K/Akt 信号通路的影响 23-24 2.2.11 统计学分析 24 2.3 结果与分析 24-30 2.3.1 秦皮素对 MCF-7 和 MDA-MB-231 细胞增殖的影响 24 2.3.2 秦皮素对 MCF-7 细胞迁移的影响 24-25 2.3.3 秦皮素对 E2 促 MCF-7 细胞增殖的影响 25-26 2.3.4 秦皮素对 E2 诱导的 MCF-7 细胞周期分布和抗凋亡作用的影响 26-27 2.3.5 秦皮素对 MCF-7 细胞 ERα蛋白表达的影响 27-28 2.3.6 秦皮素对 E2 诱导的 cyclin D1 和 Bcl-2 表达的影响 28-29 2.3.7 秦皮素对 E2 诱导的 MAPK/Erk1/2 和 PI3K/Akt 信号通路的影响 29-30 2.4 讨论 30-32 2.5 小结 32-33 3 秦皮素对机体的免疫调节 33-41 3.1 实验材料和仪器 33-34 3.1.1 材料和试剂 33 3.1.2 主要仪器 33 3.1.3 主要试剂配制 33-34 3.2 实验方法 34-36 3.2.1 免疫细胞的分离与纯化 34-35 3.2.2 秦皮素对小鼠 T、B 淋巴细胞增殖的影响 35 3.2.3 秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活力的影响 35 3.2.4 秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 35-36 3.2.5 秦皮素对小鼠 NK 细胞活性的影响 36 3.2.6 统计学分析 36 3.3 结果与分析 36-39 3.3.1 秦皮素对小鼠 T、B 淋巴细胞增殖的影响 36 3.3.2 秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活力的影响 36-38 3.3.3 秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 38 3.3.4 秦皮素对小鼠 NK 细胞活性的影响 38-39 3.4 讨论 39-40 3.5 小结 40-41 4 结论 41-43 4.1 本研究结论 41-42 4.2 本研究有待深入的内容 42-43 5 本研究创新点 43-44 参考文献 44-50 附录 A 50-51 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 51-52 致谢 52
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
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