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系统性硬化症肺部病变的临床分析和生物标志物的初步研究

作　者: 黄婧
导　师: 曾小峰
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 系统性硬化症 肺动脉高压 肺间质病变 microRNA 血清学标志物
分类号: R593.2
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的(1)寻找与系统性硬化病(systemic sclerosis, SSc)合并肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension, PAH)相关的临床危险因素,为SSc-PAH的早期诊断、病情评估和预后判断提供新的依据；(2)筛选并验证与SSc合并肺间质病变(interstitial lung disease, ILD)相关的外周血microRNA标志物；(3)筛选与SSc-PAH及SSc-ILD相关的血清蛋白标志物。方法(1)收集北京协和医院门诊及住院SSc患者的临床资料和实验室检查结果,应用右心导管确定PAH的诊断,将患者分为SSc-PAH组和SSc-nonPAH组,应用二元logistic回归分析和相关性分析寻找与SSc-PAH相关的危险因素；(2)收集在北京协和医院风湿免疫科和皮肤科门诊就诊的SSc患者的临床资料和外周血标本,通过microRNA芯片筛选和扩大样本实时定量PCR验证,寻找与SSc-ILD相关血浆和外周血单个核细胞(PBMC)的microRNA标志物,并通过生物信息学分析初步确定受其调控的相应靶基因；(3)通过血清蛋白芯片筛选与SSc肺部病变(包括肺间质病变和肺动脉高压)相关的血清蛋白标志物。结果(1)与未合并PAH的患者相比,SSc-PAH组胃食管返流症状(60%vs.36%,P<0.05)、指端溃疡(52%vs.31%,P<0.05)和毛细血管扩张症(64%vs.38%,P<0.05)发生率更高,血清IgA水平显著升高(36%vs.16%,P<0.05),而抗RNP抗体、抗SSA抗体和抗SSB抗体的阳性率亦高(分别为60%vs.18%,36%vs.18%,16%vs.4%,P<0.05),但抗Scl-70抗体阳性率更低(8%vs.50%,P<0.05),肺功能检查中FVC%、FEV1%、TLCO%和TLCO/VA%减少患者的比例在SSc-PAH组显著增多(分别为65%vs.34%,65%vs.37%,100%vs.74%,100%vs.60%,P<0.05),而FVC%/TLCO%比值在这组人群中显著升高(1.934"0.67vs.1.29±0.29,P<0.05)。二元logistic回归分析显示胃食管返流、毛细血扩张症、IgA升高、抗RNP抗体阳性、FVC%/TLCO%比值升高是SSc患者合并PAH的独立危险因素。(2)通过5例SSc患者及3例健康志愿者外周血microRNA芯片筛查,最终获得了25个差异表达的microRNA(7个上调,18个下调)。经生物信息学分析,挑选5条可能与ILD或SSc发病机制相关的microRNA (has-miR-29b、has-miR-320a、has-miR-320b、has-miR-320c和has-miR-423-5p),在30例SSc患者和16例健康志愿者中进行qPCR验证。结果显示miR-320a、miR-320b及miR-423-5p在SSc组的血浆中下调(RQ值分别为0.58±0.36vs.1.12±0.66,0.67±0.27vs.1.44±1.08,0.744±0.47vs.1.38.4±1.00,P<0.05),而miR-29、miR-320a、miR-320b及miR-423-5p在SSc-ILD患者的外周血甲.个核细胞(PBMC)中表达量均显著下调(RQ值分别为0.43±0.14vs.1.03±0.65,0.48±0.22vs.0.92±0.48,0.31±0.18vs.0.83±0.59,0.32±0.14vs.0.95±0.66,P<0.05),但在无ILD的SSc患者中其表达量与健康志愿者组无显著差异。相关性分析显示发现血浆和PBMC中的某些microRNA(血浆中的miR-320a合PBMC中的miR-29b、miR-320a, miR-320b, miR-320c以及miR-423-5p)部调与SSc合并指端溃疡有关(相关系数分别为0.603,0.436,0.547,0.470,0.728以及0.513,P<0.05),而血浆中miR-320b表达量升高与SSc合并毛细血管扩张相关(相关系数为0.527,P<0.05)。(3)通过15例SSc及5例健康志愿者外周血血清样本的蛋白质芯片筛查,获得了12个在SSc中差异表达的细胞因了,其中GDNF, IL-26, TRA-1-81, Calcitonin, SRMS, Aldolase A表达上调,Fibronectin, Serpin A5, Chordin-Like2, Serpin A1, Serpin A4, C3a表达下调。对比SSc-PAH和SSc-ILD患者的血清蛋白质表达谱,发现在SSc-PAH中IL-17D,RYK, IL-13R alpha I, CD97, Fyn表达上调,而在SSc-ILD患者中NETI, Netrin G2, Galanin表达上调。结论(1)SSc患者的某些临床症状、血清学和肺功能指标是其合并PAH的危险因索,对于此类患者进一步行有创性血流动力学检查(右心导管)可能有助于早期诊断并改善预后;(2)SSc患者血浆和PBMC中存在着多种microRNA的差异性表达,并可能与SSc不同器官受累相关：(3)SSc患者血清中存在多种细胞因子的差异性表达,并可能与其合并ILD和PAH存在相关性。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-8
前言  8-9
第一部分 系统性硬化症相关肺动脉高压的临床分析  9-17
  实验目的  9
  研究对象  9-11
  实验方法  11
  实验结果  11-14
  讨论  14-17
第二部分 系统性硬化症肺间质病变的外周血microRNA表达谱研究(一)-miRNA芯片筛选  17-32
  实验目的  17
  实验材料  17-19
  实验方法  19-23
  实验结果  23-29
  讨论  29-32
第三部分 系统性硬化症肺间质病变的外周血microRNA表达谱研究(二)-Real-timePCR验证及临床相关性分析  32-51
  实验目的  32
  实验材料  32-34
  实验方法  34-41
  实验结果  41-49
  讨论  49-51
第四部分 蛋白芯片筛查系统性硬化症肺部病变的血清学标志物  51-65
  实验目的  51
  实验材料  51
  实验方法  51-54
  实验结果  54-61
  讨论  61-65
结论  65-67
参考文献  67-70
综述  70-79
  参考文献  75-79
致谢  79-80

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 免疫性疾病 > 自身免疫性疾病、结缔组织疾病
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