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TLR4/NF-κB通路介导软脂酸诱导血管平滑肌细胞产生炎症的分子机制研究

作　者: 高啸波
导　师: 权金星
学　校: 宁夏医科大学
专　业: 内科学
关键词: 人主动脉血管平滑肌细胞 软脂酸 细胞因子 基因表达 果蝇样受体4 白细胞介素8 白细胞介素-6 单核细胞趋化蛋白-1 信号通路
分类号: R587.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：①探讨软脂酸对HA-VSMC炎症因子IL-8、IL-6和MCP-1表达的影响；②探讨不同信号通路阻断剂对软脂酸诱导HA-VSMC炎症因子IL-8、IL-6和MCP-1表达的影响。方法:采用不同剂量的软脂酸处理细胞6h、12h、24h，每个时间点设对照组（含2%BSA），LPS(10ng/ml)作用24h作为阳性对照；提取细胞RNA，实时荧光定量PCR检测IL-8、IL-6和MCP-1mRNA的表达水平；ELISA检测IL-8、IL-6和MCP-1的蛋白表达水平。分别加入PKC、磷脂酰肌醇3激酶、神经酰胺、NF-κB和MAPK抑制剂培养30min，再加入软脂酸培养6h，同时设相应的对照组（含1/1000二甲基亚砜和2%BSA）。在相应的时间点收获细胞和培养上清，实时荧光定量PCR检测IL-8、IL-6和MCP-1mRNA的表达水平；ELISA检测IL-8、IL-6和MCP-1的蛋白表达水平。结果:软脂酸显著促进人主动脉血管平滑肌细胞炎症因子IL-8、IL-6和MCP-1mRNA和蛋白表达且具有时间效应和剂量依赖关系。NF-κB阻断剂parthenolide显著抑制软脂酸诱导HA-VSMC IL-8mRNA和蛋白表达，PKC阻断剂calphostin C和白屈菜红碱部分抑制软脂酸诱导的人血管平滑肌细胞IL-8mRNA和蛋白水平的表达，myriocin和wortmannin对软脂酸诱导的IL-8表达无明显作用。parthenolide和PKC阻断剂白屈菜红碱下调软脂酸诱导的IL-6mRNA和蛋白表达，而MAPK阻断剂PD98059和PI3K抑制剂wortmannin对软脂酸诱导的IL-6mRNA和蛋白表达均无明显作用；parthenolide显著抑制软脂酸诱导HA-VSMC MCP-1mRNA和蛋白表达，而白屈菜红碱、wortmannin和神经酰胺抑制剂myriocin对软脂酸诱导MCP-1mRNA和蛋白的表达均无明显作用；结论:①软脂酸诱导人血管平滑肌细胞IL-8、IL-6和MCP-1等炎症因子表达，导致HVASMC产生炎症反应。②NF-κB和PKC通路介导了软脂酸诱导人血管平滑肌细胞IL-8、IL-6基因的表达，软脂酸诱导人血管平滑肌细胞MCP-1基因的表达是由NF-κB通路介导。目的：探讨TLR-4/NF-κB信号在软脂酸调控HAVSMC炎症因子表达中的作用。方法：构建TLR4shRNA腺病毒载体，采用pGSadeno-TLR4感染生长状态良好的HA-VSMC，采用实时荧光定量PCR检测TLR4mRNA的表达水平，Western blotting检测细胞TLR4蛋白的表达水平,观察软脂酸诱导的HVASMC IL-8、IL-6和MCP-1mRNA和蛋白水平的表达。采用软脂酸干预细胞6h，提取细胞核蛋白，采用ELISA测定NF-Κb p65亚基的结合活性。结果：pGSadeno-TLR4感染HVASMC显著抑制软脂酸诱导的NF-κB活性增加以及IL-8、IL-6和MCP-1mRNA和蛋白的表达，表明软脂酸通过激活TLR4→炎症转录因子NF-κB，继而诱导人血管平滑肌细胞MCP-1、IL-6和IL-8等炎症因子的表达。结论：TLR-4/NF-κB通路介导了软脂酸诱导人主动脉血管平滑肌细胞IL-8、IL-6及MCP-1基因表达。

全文目录


第一部分 软脂酸对人血管平滑肌细胞炎症因子表达的调节作用  4-7
  中文摘要  4-5
  ABSTRACT  5-7
第二部分 TLR-4/NF-KB通路在软脂酸诱导人血管平滑肌细胞炎症因子表达中的作用  7-10
  中文摘要  7-8
  ABSTRACT  8-10
第一部分 软脂酸对人血管平滑肌细胞炎症因子表达的调节作用  10-39
  前言  10-12
  材料和方法  12-22
  结果  22-32
  讨论  32-34
  结论  34-36
  参考文献  36-38
  缩略词表  38-39
第二部分 TLR-4/NF-κB通路在软脂酸诱导人血管平滑肌细胞炎症因子表达中的作用  39-83
  前言  39-43
  材料和方法  43-65
  结果  65-73
  讨论  73-77
  结论  77-79
  参考文献  79-81
  缩略词表  81-83
综述  83-95
  参考文献  91-93
  缩略词表  93-95
致谢  95-97
在学期间研究成果  97-99
基金资助  99-101
个人简历  101

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 胰岛疾病 > 糖尿病性昏迷及其他并发症
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