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CORM-2对脂多糖刺激HUVEC及小鼠的TM及EPCR表达的影响及机制研究

作　者: 孟祥林
导　师: 赵鸣雁
学　校: 哈尔滨医科大学
专　业: 急诊医学
关键词: 一氧化碳释放因子内皮细胞内毒素 EPCR 血栓调节蛋白
分类号: R459.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：观察脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞及C57BL/6小鼠后血栓调节蛋白（TM）及内皮细胞蛋白C受体（EPCR）表达的变化及一氧化碳释放因子CORM-2对其影响及机制。方法：将人脐静脉内皮细胞分为五组：Control组、LPS组、CORM-2组、CORM-2+LPS组、iCORM-2+LPS组，应用LPS刺激HUVEC并给予的CORM-2，分别在给药后8h,16h,24h检测各组细胞培养液MMP-2、TM及EPCR水平,并在刺激后8h检测各组细胞TM，EPCR的mRNA及蛋白表达情况，并观察各组细胞核转录因子NF-kB活性；30只C57BL/6小鼠随机分为Control组、LPS组、CORM-2组、CORM-2+LPS组、iCORM-2+LPS组，每组6只；给予LPS后8小时处死小鼠，留取血浆、肺组织，ELISA法检测血浆sTM,sEPCR水平变化， Western Blot分析肺组织TM，EPCR表达水平变化。结果：与Control组比较，CORM-2组各指标无明显变化，其余各组细胞在给予LPS后MMP2表达增加，培养液中TM及EPCR脱落量增加，核转录因子NF-kB增强，其余各组小鼠血浆sTM,sEPCR增加组织蛋白量减少；LPS组细胞TM及EPCRmRNA水平下调，蛋白表达量明显减少，细胞活性减低，给予LPS+CORM-2预处理后，与LPS组比较，细胞活性增加，NF-kB核转录活性减低，TM及EPCR mRNA水平上调，MMP-2表达下降，TM及EPCR脱落减少，TM及EPCR蛋白表达增加，小鼠血浆sTM,sEPCR量减少，组织蛋白量增加；而iCORM-2无明显作用。结论：CORM-2对于LPS刺激的HUVEC具有保护作用，可以通过抑制NF-kB活性，减轻NF-kB对TM及EPCR mRNA的下调作用；同时可以抑制MMP2的表达及活性，减少内皮细胞表面的TM及EPCR脱落，从而提高血管内皮细胞TM及EPCR的表达；同时CORM-2对于LPS刺激的小鼠，可以减少TM及EPCR表达，提高其在组织表达。

全文目录

中文摘要  6-7
英文摘要  7-8
1、文献综述  8-24
  1.1 脓毒症  8-11
  1.2 内皮细胞  11-13
  1.3 脓毒症中的内皮细胞  13-19
  1.4 CO与脓毒症  19-22
  1.5 TM和EPCR与脓毒症  22-23
  1.6 结语  23-24
2、前言  24-25
3、材料与方法  25-45
  3.1 研究对象、实验器材及试剂  25-27
  3.2 实验方法  27-45
    3.2.1 体外实验  27-42
    3.2.2 动物实验  42-44
    3.2.3 统计分析  44-45
4、结果  45-54
  4.1 HUVEC 鉴定  45
  4.2 LPS 浓度对 HUVEC 活力的影响  45
  4.3 CORM-2 对 LPS 刺激的 HUVEV 活性的影响  45-46
  4.4 CORM-2对LPS刺激的HUVEV细胞培养液sEPCR、sTM及MMP-2水平影响  46-48
  4.5 Western blot 检测细胞 EPCR, TM 蛋白表达情况  48-49
  4.6 各组 HUVEC 细胞 EPCR,TM mRNA 表达情况  49-51
  4.7 各组细胞在干预 8 小时后 NF-KB 活性  51-52
  4.8 小鼠血浆sTM水平  52-53
  4.9 小鼠肺组织 TM 蛋白含量  53-54
5、讨论  54-58
  5.1 LPS 对 HUVEC 细胞活性的影响  54
  5.2 LPS 对 HUVEC 中 TM 及 EPCR 表达的影响  54-55
  5.3 CORM-2 对 LPS 刺激 HUVEC 的 TM 及 EPCR 表达的影响  55-56
  5.4 CORM-2 对 LPS 刺激 HUVEC 活性的影响  56
  5.5 CORM-2 对 LPS 刺激小鼠 TM 表达的影响  56-58
6、结论  58-59
参考文献  59-65
个人简历  65
缩写词表  65-66

CORM-2对脂多糖刺激HUVEC及小鼠的TM及EPCR表达的影响及机制研究

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