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Sulfiredoxin-1对双氧水诱导的PC12细胞氧化应激损伤的保护作用研究

作　者: 李琼
导　师: 赵涌
学　校: 重庆医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 氧化应激 sulfiredoxin-1 2-Cys Prdxs 神经保护
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

背景：氧化应激能够导致体内多种细胞及蛋白质过氧化，并对帕金森病、阿尔茨海默病以及缺血性脑病等神经系统疾病的发生发展有着重要作用。Sulfiredoxin-1（Srxn1）为一种内源性抗氧化蛋白，具有神经保护作用。然而，Srxn1在氧化应激中的作用机制还未被深入研究。目的：探讨Srxn1对双氧水诱导的PC12细胞氧化应激损伤的抗氧化保护作用及其潜在机制。方法：（1）用不同浓度（60uM,100uM,140uM,180uM,200uM,240uM）的H₂O₂作用于PC12细胞24h，通过MTT和LDH测定从中筛选出最适H₂O₂浓度。再用该浓度作用于PC12细胞不同时间（3h,6h,12h,24h,48h），通过MTT和LDH测定从中筛选出最适H₂O₂时间。（2）构建三条Srxn1干扰质粒载体（PLVT574，PLVT575，PLVT576）及一条阴性载体（PLVT4），通过脂质体（Lipofectamine2000）瞬时转染给PC12细胞，在倒置显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态及转染效率，用RT-PCR和Western Blot测定干扰效率。（3）用MTT及LDH试剂盒测定细胞活性及细胞损伤程度，用超氧化物歧化酶（SOD）、微量还原型谷胱甘肽测定试剂盒分析细胞内氧化应激状态。RT-PCR和Western国家自然科学基金资助（No.81070917和81271460）Blot进一步测定Srxn1的表达与2-Cys Prdxs活性之间的关系。结果：（1）MTT和LDH测定显示，180uM H₂O₂作用于PC12细胞24h为最适氧化应激模型。（2）RT-PCR和Western Blot分析显示，与对照组相比，PLVT574、PLVT576和PLVT4的干扰效率不明显，PLVT575的干扰效率显著（P<0.01）。（3）MTT和LDH结果显示，干扰Srxn1能够导致细胞活性的降低及细胞损伤程度的增加。超氧化物歧化酶（SOD）和微量还原型谷胱甘肽测定试剂盒分析显示，SOD和GSH在干扰Srxn1的PC12细胞中表达降低。RT-PCR和Western Blot分析显示，Srxn1的减少与2-Cys Prdxs的活性降低有关，且2-Cys Prdxs的水平在H₂O₂处理的PC12细胞中升高。结论：这些结果表明Srxn1能够保护PC12细胞免受H₂O₂诱导的氧化应激损伤，且这种保护作用与Prdxs的活性有关。Srxn1能够发挥抗氧化损伤的保护作用，因此Srxn1有望成为神经系统中氧化应激干预的新靶点。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
前言  11-13
第一部分：PC12 细胞氧化应激模型的建立  13-20
  1 实验材料  13-14
  2 实验方法  14-16
  3 结果  16-19
  4 讨论  19-20
第二部分：Srxn1 干扰质粒的构建及干扰效率测定  20-30
  1 实验材料  20-22
  2 试验方法  22-26
  3 结果  26-28
  4 讨论  28-30
第三部分：Srxn1 的抗氧化作用及其潜在机制研究  30-39
  1 实验材料  30-31
  2 试验方法  31-32
  3 结果  32-38
  4 讨论  38-39
结论  39-40
参考文献  40-44
文献综述  44-51
  参考文献  47-51
致谢  51-52
攻读硕士期间发表的论文  52-53

Sulfiredoxin-1对双氧水诱导的PC12细胞氧化应激损伤的保护作用研究

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