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丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠血管新生的影响及机理探讨

作　者: 徐瑾瑜
导　师: 顾星；张秋雁
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中医诊断学
关键词: 丹龙醒脑方 脑缺血再灌注损伤 瘀阻脑络 血管新生因子VEGF Flk-1 Ang-1 bFGF 病证研究
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


目的：通过动物实验,观察丹龙醒脑方对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑血管新生及其因子的影响,探讨其对缺血性中风病理机制的干预作用。方法：本实验采用MCAO法建立SD雄性大鼠脑缺血再灌注损伤模型,将造模成功的存活大鼠按随机数字表法随机分成6组：丹龙醒脑方大剂量组、丹龙醒脑方中剂量组、丹龙醒脑方小剂量组、尼莫地平阳性对照组、模型组、假手术组,每组8只,除假手术组外,其余各组均采用MCAO法造模,术后2h恢复再灌注,假手术组只结扎颈外动脉,不进行缺血再灌注。术后12h进行神经功能学评分。从术后第一天开始灌胃进行药物干预,每天一次,连续七天,假手术组及模型组给予等体积蒸馏水,七天后麻醉处死,迅速断头取脑,梗死面积测定采用TTC染色法,病例形态学观察采用石蜡包埋切片,在高倍显微镜下观察,通过标记脑缺血组织局部CD34表达来测定内皮细胞数和微血管密度,VEGF、Flk-1、Ang-1、bFGF等生化指标的测定采用免疫组化方法。结果：(1)神经功能学评分：模型组与假手术组相比,神经功能学评分明显升高(P<0.01);各用药组与模型组相比神经功能学评分降低,有统计学意义(P<0.05)；丹龙醒脑方各组与尼莫地平组比较无差异(P>0.05)；丹龙醒脑方各组间比较无明显差异(p>0.05)。(2)脑梗死面积：模型组与假手术组相比,脑梗死面积明显增大(P<0.01);各用药组组与模型组相比脑梗死面积降低,有统计学意义(P<0.05)；丹龙醒脑方大、中剂量组和尼莫地平组有差异(P<0.05),丹龙醒脑方小剂量组与尼莫地平组比较无差异(P>0.05)；丹龙醒脑方各组间比较无明显差异(P>0.05)。(3)缺血海马区内皮细胞数及微血管密度：模型组与假手术组相比,内皮细胞数和微血管密度均增加(P<0.05);各用药组与模型组相比内皮细胞数和微血管密度增加,有统计学意义(P<0.05);丹龙醒脑方各组和尼莫地平组无明显差异(P>0.05)；丹龙醒脑方各组间比较无明显差异(p>0.05)。(4)缺血海马区血管新生因子VEGF、Flk-1、Ang-1、bFGF蛋白表达：模型组与假手术组相比,VEGF、Flk-1、Ang-1、bFGF蛋白表达均增强(P<0.05)；各用药组与模型组相比表达增强,有统计学意义(P<0.05);丹龙醒脑方各组和尼莫地平组相比无明显差异(P>0.05)；丹龙醒脑方各组间比较无明显差异(P>0.05)。结论：丹龙醒脑方能改善脑缺血再灌注后神经功能,缩小梗死面积。脑缺血再灌注损伤后,血管新生因子启动,丹龙醒脑方能增加内皮细胞数及微血管密度,增强血管新生因子VEGF、Flk-1、Ang-1、 bFGF的表达,从而能够促进新生血管的生长及侧枝循环的再建立,这可能是其能改善神经功能的作用机制之一。

全文目录


中英文对照表格  6-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-11
引言  11-12
第一部分 材料与方法  12-17
  1、实验材料  12-13
    1.1 实验动物  12
    1.2 实验药品  12
    1.3 主要试剂  12-13
    1.4 主要仪器  13
  2、实验方法  13-17
    2.1 实验分组  13
    2.2 造模方法  13-14
    2.3 给药剂量及方式  14
    2.4 实验动物取材  14
    2.5 检测指标  14-15
    2.6 检测方法  15-16
    2.7 数据处理  16-17
第二部分 结果与分析  17-22
  1、神经功能学评分  17
  2、脑梗死面积测定  17-18
  3、细胞形态学观察  18
  4、免疫组化指标测定  18-22
    4.1 内皮细胞计数及微血管密度  18-19
    4.2 Ang-1的蛋白表达  19
    4.3 bFGF的蛋白表达  19-20
    4.4 VEGF的蛋白表达  20-21
    4.5 FIk-1的蛋白表达  21-22
第三部分 讨论  22-29
  1 传统中医对缺血性中风瘀阻脑络症候的认识  22
  2 中西医对缺血性中风的研究  22-23
    2.1 中医对缺血性中风的研究  22-23
    2.2 现代医学对缺血性中风的研究  23
  3 分子生物学角度探讨缺血性中风后血管新生的机制  23-25
    3.1 血管新生  23-24
    3.2 VEGF及其受体FIk-1  24
    3.3 bFGF  24-25
    3.4 Ang  25
  4 丹龙醒脑方组方特点及其对脑缺血再灌注的影响  25-29
    4.1 丹龙醒脑方组方  25-26
    4.2 丹龙醒脑方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能学评分的影响  26-27
    4.3 丹龙醒脑方对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑海马区梗死面积的影响  27
    4.4 丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠缺血组织内皮细胞数和微血管密度的影响  27
    4.5 丹龙醒脑方对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑血管新生因子的影响  27-29
结论  29-30
致谢  30-31
参考文献  31-34
附录  34-48
  附录一 TTC染色图片  34-36
  附录二 病理图片  36-37
  附录三 免疫组化表达图片  37-42
  附录四 文献综述  42-48

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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