学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

tPA和PAI-1在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的作用初探

作　者: 张伶俐
导　师: 徐晓静
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: tPA PAI 牛 卵丘细胞 扩散
分类号: S823
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 2次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


为了解组织型纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator, tPA)和纤溶酶原激活剂抑制剂1(plasminogen activator inhibitor, PAI-1)在牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)体外成熟进程中的可能作用；本研究首先运用了实时定量RT-PCR和ELISA技术检测了体外不同成熟时间(0h、8h、16h和24h)卵丘细胞中纤溶酶原(plasminogen)基因相对表达变化和tPA活性变化,然后通过添加不同浓度的tPA(0ng/ml.0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml)、PAI-1(0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml)观察透明质酸合成酶2(Hyaluronan synthase2,HAS2)基因在体外成熟培养16h牛卵丘细胞中相对表达变化。最后以1ng/ml tPA与10ng/ml PAI做添加组合,在体外成熟培养16h后,统计牛卵丘细胞中HAS2基因相对表达,牛卵母细胞中GDF-9、BMP-15基因相对表达,以及牛COCS的扩散程度。结果如下,1.在COCs体外成熟过程中,牛卵丘细胞Plasminogen mRNA相对表达,在成熟8h和24h显著高于0h和16h(P<0.05)；同时卵丘细胞中的tPA活性在成熟培养8h和24h均高于16h且差异显著(P<0.05)。2.分别添加不同浓度tPA、PAI-1(0ng/ml、0.1ng/m、1ng/m、10ng/ml)体外成熟16h后,HAS2基因在各tPA添加组卵丘细胞中的相对表达水平低于对照组,其中1ng/ml添加组最低,与对照组相比差异显著(P<0.05)；添加不同浓度PAI-1处理后,在1ng/ml和10ng/ml添加组卵丘细胞中的HAS2mRNA相对表达水平显著高于对照组,其中10ng/ml添加组最高3.以1ng/mltPA和10ng/mlPAI-1做添加组合,在体外成熟16h后发现,在PAI-1添加组中,卵丘细胞的HAS2mRNA相对表达水平显著高于其他各处理组(P<0.05)；卵丘层的扩散程度显著高于对照组和tPA添加组(P<0.05)。同时卵母细胞中BMP-15和GDF-9的mRNA相对表达水平在tPA添加组最高,PAI-1添加组最低,俩者差异显著(P<0.05)。综上,tPA在体外成熟早期(8h前后)可能有重要作用。在体外成熟16h,PAI-1在促进牛卵丘细胞表达HAS2基因和扩散发生的同时又下调了卵母细胞中BMP-15和GDF-9基因的表达水平；而tPA的作用与之相反。故此推测,PAI-1应该是卵丘细胞分泌的并促进其在成熟过程中扩散发生的重要调节因子。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-6
目录  6-8
插图和附表清单  8-9
缩略语表  9-10
1 前言  10-15
  1.1 卵母细胞成熟概述  10-11
  1.2 卵丘细胞与卵母细胞  11-13
  1.3 卵丘细胞扩散  13
  1.4 HA与HAS2  13
  1.5 PA-系统概述  13-15
2 材料与方法  15-19
  2.1 仪器与试剂  15-16
  2.2 方法  16-19
    2.2.1 COCs的采集及体外成熟培养  16-17
    2.2.2 tPA活性检测  17
    2.2.3 RNA提取和反转录  17
    2.2.4 实时定量PCR  17-18
    2.2.5 卵丘扩散程度检测  18
    2.2.6 数据统计  18-19
3 结果与分析  19-25
  3.1 PCR产物特异性确定  19-21
  3.2 成熟过程中牛卵丘细胞Plasminogen基因表达及tPA活性  21-22
    3.2.1 成熟过程中卵丘细胞Plasminogen基因表达  21
    3.2.2 成熟过程中卵丘细胞tPA活性  21-22
  3.3 添加不同浓度tPA成熟培养16h卵丘细胞HAS2基因表达的影响  22
  3.4 添加不同浓度PAI-1成熟培养16h卵丘细胞HAS2基因表达的影响  22-23
  3.5 添加tPA与PAI-1组合成熟培养16h卵丘细胞HAS2基因表达的影响  23
  3.6 添加tPA与PAI-1组合成熟培养16h对卵丘细胞扩散的影响  23-25
  3.7 组合(tPA+PAI-1)对卵母细胞GDF-9和BMP-15基因表达的影响  25
4 讨论  25-27
  4.1 tPA和Plasminogen在不同体外成熟时间卵丘细胞中的表达  25
  4.2 tPA和PAI-1在COCs成熟过程中对卵丘细胞的作用  25-26
  4.3 tPA和PAI-1对卵丘扩散的影响  26
  4.4 tPA和PAI-1对卵母细胞表达GDF-9和BMP-15的影响  26-27
5 结论  27-28
致谢  28-29
参考文献  29-35
作者简介  35

相似论文

  1. 医学超声图像去噪方法研究,TP391.41
  2. 伏牛山世界地质公园生态旅游产品设计研究,F592.7
  3. 聚对苯二甲酸-1，4-环己烷二甲醇酯（PCT）的合成与性能研究,TQ323.4
  4. 莴笋渗透脱水传质动力学及渗后热风干燥特性研究,TS255.52
  5. 单细胞中光敏化单态氧的间接成像,Q2-3
  6. 黄瓜根结线虫病的生物防治及其生态有机药肥研制,S436.421
  7. 夏南牛和皮南牛微卫星标记研究及生长发育模型的建立,S823
  8. 牛血浆蛋白加工特性及应用研究,TS251.1
  9. 可调谐二极管激光吸收光谱技术测定农田氨挥发的初步研究,S158.5
  10. 夏南牛和中国西门塔尔牛肉品特性的比较研究,S823
  11. 教育创新的反应扩散模型的研究,G40
  12. 重组作用对猪肉盐溶蛋白质加工特性的影响研究,TS251.1
  13. 牛半腱肌中多聚磷酸酶酶学特性及其反应体系动态研究,TS251.1
  14. 卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及其发育能力的影响,S828
  15. PRP/BIO-OSS复合物对纯钛金属钉周骨缺损修复的实验研究,R783.6
  16. SAR图像超分辨率重构研究,TN957.52
  17. 锂离子电池电极材料黑磷与LiMn2O4的第一性原理研究,TM912
  18. 固体氧化物燃料电池负极材料Srn+1TinO3n+1（n=1,2,3,∞）的第一性原理研究,TM911.4
  19. 可燃气体泄漏扩散的CFD模拟研究,X937
  20. 3.0T高场磁共振对中央型肺癌的初步研究,R734.2
  21. 扩散流中上下游鞘层结构的实验研究,O53

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 牛
© 2012 www.xueweilunwen.com