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针刺扶突穴等对颈部切口痛大鼠脊髓SP、NK-1R、COX-1及5-HT1AR、5-HT2AR表达的影响

作　者: 乔丽娜
导　师: 刘俊岭
学　校: 中国中医科学院
专　业: 中西医结合基础
关键词: 针刺镇痛 甲状腺区术后痛 脊髓背角 SP NK-1R COX-1 5-HT1AR 5-HT2AR
分类号: R245
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


研究背景痛症是针灸治疗的第一适应大症,在针刺镇痛(针刺麻醉)的适应症中,首选之一为甲状腺手术。但是,针刺镇痛行甲状腺手术的神经生物学机制尚未进行过系统研究。术后痛是急性疼痛的一种表现形式,临床上,针刺可明显缓解口腔手术术后痛、阑尾切除术后痛、骨科术后痛、甲状腺术后切口痛、四肢及妇科手术后切口痛等。动物实验也证明,电针可减轻足底切口痛行为反应,电生理学实验证明电针可以抑制足底切口痛大鼠Aδ纤维和C类纤维的放电。但是,针刺缓解切口痛的作用机制还不完全清楚,研究还不多；特别是针刺减轻颈部切口痛还没有任何报道。因此,本实验在大鼠甲状腺区切口痛的模型上,探讨电针双侧扶突穴对动物疼痛反应的影响及脊髓背角SP及其NK1受体与COX-1、5-HT1A、5-HT2A的表达变化,探讨电针缓解术后疼痛的脊髓机制,为临床针麻行甲状腺手术提供实验依据。材料与方法Wistar雄性大鼠120只,随机分为正常对照组(n=24),模型组(n=24),扶突穴组(n=24),足三里-阳陵泉穴组(n=24),合谷-内关穴组(n=24)。异氟醚麻醉下,在大鼠颈部做纵行切口,造成切口痛模型,分别电针双侧扶突穴,双侧足三里、阳陵泉穴,双侧合谷、内关穴(2／15 Hz,15min,1mA；15min,2 mA),用辐射热分别在术前、术后、针后照射大鼠颈部／切口引起的躲避潜伏期作为痛敏分数衡量动物痛反应(每组10例),在麻醉状态下,一部分(每组8例)动物常规灌流取颈段脊髓(颈1-颈4),连续冰冻切片,用免疫组织化学方法检测颈段脊髓背角SP、NK-1、COX-1和5-HT1A、5-HT2A的表达；另一部分动物(每组6例)取颈段脊髓(颈1-颈4)组织液氮研磨提取RNA和蛋白,分别用定量PCR和Western blot方法来检测脊髓中SP、COX-1和5-HT2A的表达的变化。结果1)电针对颈部切口痛大鼠痛行为的影响与颈部切口术前(模型组15.94±4.21,扶突穴组14.48±2.76,合谷内关组13.72±2.54,足三里-阳陵泉组13.04±3.20)比较,各组动物的热辐射躲避潜伏期(模型组10.10±3.21,扶突穴组8.99±2.99,内关组8.33±1.33,足三里-阳陵泉组8.27±1.67)明显缩短(P<0.05)；电针扶突穴后动物痛阈值(15.98±5.04)与本组术后4h(8.99±2.99)比较、电针合谷、内关穴后动物痛阈值(12.56±3.05)与本组术后4h(8.33±1.33)比较,其躲避潜伏期均显著延长(P<0.05),电针扶突穴后动物的痛阈值明显高于电针合谷、内关动物(P<0.05)。电针足三里-阳陵泉穴后痛阈值(9.54±2.34)与本组术后(8.27±1.67)比较差异无统计学意义(P>0.05)。2)电针对颈部切口痛大鼠脊髓背角背角SP、NK-1R、COX-1及5-HT1A,5-HT2A影响的免疫组织化学研究颈部切口术后,模型组动物脊髓背角浅层SP(76.76±12.51)、NK-1(71.02±7.08)、COX-1(60.84±8.02)的灰度值均明显低于正常对照组(93.74±14.01,110.60±0.97,95.16±8.73)(P<0.05),即表达显著升高。与模型组比较,扶突穴组SP(94.90±7.32)、NK-1(91.69±1.28)、COX-1(105.60±13.84)的灰度值显著升高,表达明显下调(P<0.05))；足三里-阳陵泉穴组SP灰度值(73.72±11.06)、NK-1灰度值(67.81±15.23)、COX-1灰度值(76.59±8.07),与模型组比较(76.76±12.51,71.02±7.08,60.84±8.02)无显著差异(P>0.05)。术后,与正常组(113.9±6.76,134.33±8.06)比较,模型组5-HT1A受体灰度值(95.13±4.56)明显降低(P<0.05),5-HT2A灰度值稍有降低(129.4515.62)。与模型组比较,扶突穴组5-HT1A(78.81±4.57)、5-HT2A(110.89±8.33)灰度值明显下降(P<0.05),而足三里-阳陵泉组5-HT1AR灰度值(94.36±4.20)5-HT2AR灰度值(130.43±14.70)与之没有明显差异(P>0.05)。3)电针对颈部切口痛大鼠脊髓背角NK-1R mRNA、COX-1mRNA及5-HT1AR mRNA、5-HT2ARmRNA及蛋白水平表达的影响与正常动物组NK-1R mRNA的表达水平(1.393±0.430)相比,模型组动物颈部手术后,颈段脊髓(C1-C4)的NK-1R mRNA的表达水平(6.608±0.689)明显增高(P<0.05),与模型组比较(6.608±0.689),电针双侧扶突穴后颈段脊髓(C1-C4)NK-1受体的表达(0.339±0.074)显著降低(P<0.05),电针双侧的合谷-内关穴后颈段脊髓(C1-C4) NK-1受体的表达(1.089±0.797)与模型组比较(6.608±0.689)也显著降低(P<0.05),而电针双侧扶突穴组mRNA水平与电针双侧合谷、内关穴组比较没有差别。足三里-阳陵泉组颈段脊髓(C1-C4)NK-1受体的表达(4.513±1.556)明显高于扶突穴组(0.339±0.074)与合谷-内关组(1.089±0.797),足三里-阳陵泉组腰段脊髓(L4-S3)mRNA的表达(2.3708±0.988)低于本组颈段脊髓,但没有统计学差异。与正常动物组(1.227±0.158)相比,模型组动物颈部手术后,颈段脊髓(C1-C4)的COX-1mRNA的表达水平(4.519±1.211)明显增高(P<0.05),与模型组比较(4.519±1.211),电针双侧扶突穴后颈段脊髓(C1-C4)COX-1 mRNA的表达(1.171±0.249)、电针双侧的合谷、内关穴后颈段脊髓(C1-C4) COX-1mRNA的表达(1.321±0.160)都显著降低(P<0.05),而电针双侧扶突穴组mRNA水平与电针双侧合谷-内关穴组比较没有差别。足三里-阳陵泉组颈段脊髓(C1-C4) COX-1mRNA的表达(5.812±1.734)明显高于扶突穴组(1.171±0.249)与合谷-内关组(1.321±0.160),足三里-阳陵泉组腰段脊髓(L4-S3)COX-1mRNA的表达(2.3708±0.988)明显低于本组颈段脊髓表达水平(2.685±0.921)(P<0.05)。与正常动物组(1.109±0.154)相比,模型组动物颈部手术后,颈段脊髓(C1-C4)的5-HT1ARmRNA的表达水平(6.439±1.770)明显增高(P<0.05),与模型组比较(6.439±1.770),电针双侧扶突穴后颈段脊髓(C1-C4) 5-HT1AR mRNA的表达(1.676±0.684)、电针双侧的合谷-内关穴后颈段脊髓(C1-C4)5-HT1AR mRNA的表达(2.320±1.043)都显著降低(P<0.05),而电针双侧扶突穴组mRNA水平与电针双侧合谷、内关穴组比较没有显著差别。足三里-阳陵泉组腰段脊髓(L4-S3)5-HTR mRNA的表达(20.647±0.238)明显低于本组颈段脊髓表达水平(3.057±1.757)(P<0.05)。Western blot结果显示,所有标本的内参都显示清晰的条带,经统计,模型组5-HT2AR蛋白的表达(0.882±0.139)明显高于正常组(0.448±0.106)(P<0.05),电针双侧扶突穴后5-HT2AR的表达(1.871±0.264)较模型组(0.882±0.139)明显升高(P<0.05),电针双侧合谷-内关穴后5-HT2A的表达(1.430±0.507)也明显高于模型组(0.882±0.139)(P<0.05)。并且电针双侧扶突穴后5-HT2A受体的表达(1.871±0.264)水平显著高于电针双侧合谷-内关穴后5-HT2A蛋白的表达(1.430±0.507)水平(P<0.05)结论1)大鼠颈部切口可引起的明显的痛反应,上调颈段脊髓SP、NK-1R、COX-1表达增高,说明手术造成的组织损伤引起了外周及中枢的敏化。2)电针双侧“扶突穴”与合谷-内关穴均可缓解颈部切口可引起的明显的痛反应,并且扶突穴产生的对痛敏的抑制效应优于针刺双侧合谷-内关穴。针刺双侧“扶突穴”或“合谷”-“内关”穴可显著下调颈部切口痛引起的脊髓增加的NK-1 mRNA、COX-1mRNA、5-HT1ARmRNA的表达和加强5-HT2AR蛋白的表达水平的上调,说明颈部脊髓内5-HT1AR和5-HT2AR参与电针缓解颈部切口痛行为反应。3)针刺双侧足三里-阳陵泉穴对颈部切口痛反应及SP、NK-1R、COX-1、5-HT1AR、5-HT2AR的表达没有明显作用,而可下调腰段脊髓的NK-1R mRNA、COX-1mRNA、5-HT1AR mRNA,说明电针足三里-阳陵泉的镇痛作用有神经节段性差异。

全文目录


英文缩略词表  6-7
中文摘要  7-11
英文摘要  11-17
文献综述  17-44
  一、针刺麻醉和针药复合麻醉研究现状  17-21
  二、脊髓背角在痛敏及针刺镇痛中作用的实验研究  21-33
  三、术后痛机制研究进展  33-37
  参考文献  37-44
论文部分-------针刺扶突穴等对颈部切口痛大鼠脊髓SP、NK-1R、COX-1及5-HTlAR、5-HT2AR表达的影响  44-99
  前言  44-46
  第一部分 电针对颈部切口痛大鼠痛行为的影响  46-54
    前言  46
    1 材料与方法  46-48
    2 实验结果  48-49
    3 讨论  49-52
    4 小结  52-54
  第二部分 针刺扶突穴等对颈部切口痛大鼠脊髓背角SP、NK-1R、COX-1及5-HT1AR、5-HT2AR影响的免疫组织化学研究  54-66
    前言  54
    1 材料与方法  54-58
    2 实验结果  58-61
    3 讨论  61-65
    4 小结  65-66
  第三部分 针刺扶突穴等对颈部切口痛大鼠脊髓NK-1R、COX-1及5-HT1AR、5-HT2ARmRNA和蛋白水平表达的影响  66-88
    前言  66-67
    1 材料与方法  67-76
    2 实验结果  76-80
    3 讨论  80-87
    4 小结  87-88
  总结  88-89
  参考文献  89-99
致谢  99-100
个人简历  100-102

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中医临床学 > 针灸学、针灸疗法
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