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液相色谱—串联质谱法测定生物样品中的沙丁胺醇和奈诺沙星及其应用

作　者: 马敏康
导　师: 钟大放
学　校: 浙江工业大学
专　业: 药物分析
关键词: 沙丁胺醇气雾剂奈诺沙星液相色谱-串联质谱法生物等效性药物-药物相互作用
分类号: O657.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

1.沙丁胺醇定量分析方法研究和应用背景沙丁胺醇是选择性的短效β2受体激动剂,有较强的支气管扩张作用,临床上用于治疗支气管哮喘、喘息性支气管炎及肺气肿引起的支气管痉挛等。气雾剂用于缓解哮喘急性发作的临床最小起始剂量为100μg,如果有必要可增至200μg,目前仅有两篇文献报道采用气相色谱-质谱法分别测定给予沙丁胺醇气雾剂180μg和360μg后的血药浓度。目的建立灵敏、快速的液相色谱-串联质谱法测定气雾剂给药后人血浆中的沙丁胺醇,并应用于硫酸沙丁胺醇气雾剂的生物等效性研究。方法以d9-沙丁胺醇为内标,血浆样品经乙腈蛋白沉淀后,采用Luna HILIC (100mm×3.0mm,3μn)色谱柱分离。流动相为乙腈(含0.1%甲酸)：5mmol·L-1醋酸铵(氨水调节pH为8.5)(93：7,v/v),使用等度洗脱,进样体积2.0μL,样品分析时间为3.5min。采用电喷雾电离源(ESI),正离子检测模式、多反应监测(MRM),用于定量分析的离子反应分别为m/z240→(148+166)(沙丁胺醇)和m/z249→(149+167)(d9-沙丁胺醇)。结果沙丁胺醇定量方法的线性范围为11.7～2340pg·mL-1,定量下限达11.7pg·mL-1,日内、日间精密度(RSD)均小于14.1%,准确度(RE)在-3.8%～-0.8%之间。本法应用于健康受试者给予硫酸沙丁胺醇气雾剂200μg后的制剂生物等效性研究,受试制剂与参比制剂的沙丁胺醇AUCo-t和Cmax几何均值比的90%置信区间均在80%～125%之间,结果显示两种制剂具有生物等效性。结论采用稳定同位素内标的液相色谱-串联质谱法快速、灵敏和准确,适用于硫酸沙丁胺醇的制剂生物等效性研究。2.奈诺沙星定量分析方法建立和应用背景苹果酸奈诺沙星为处于临床试验阶段的无氟喹诺酮类抗生素,是一种选择性细菌拓扑异构酶抑制剂,有广谱抗菌活性。丙磺舒可抑制阴离子药物分子在体内的主动转运过程,竞争性抑制多种主要经肾脏排泄药物从肾小管的排泌,增加药物的血药浓度,因此有必要评价丙磺舒对奈诺沙星药动学的影响。目的建立灵敏、专属性好、操作简便的液相色谱-串联质谱法测定人血浆及尿中的奈诺沙星浓度,并用于评价丙磺舒对苹果酸奈诺沙星胶囊在中国健康志愿者单次空腹口服给药药动学的影响,为丙磺舒和奈诺沙星的药物-药物相互作用研究提供依据。方法12名健康志愿者随机、开放、双周期交叉单独口服苹果酸奈诺沙星胶囊以及合并口服丙磺舒片和苹果酸奈诺沙星胶囊后,采用液相色谱-串联质谱法测定人血浆及尿中奈诺沙星的浓度。结果12名受试者单剂量口服苹果酸奈诺沙星胶囊以及合并口服丙磺舒片和苹果酸奈诺沙星胶囊后,血浆中奈诺沙星的Cmax分别为5.67和5.76μg·mL-1, Tmax分别为1.26和1.74h,AUC0-t为46.3和58.4mg·h·L-1,t1/2为9.76和9.62h,尿样中奈诺沙星的累积排泄百分率为分别为58.2%和56.5%,肾清除率为6.41和4.96L·h-1。结论药动学参数AUC0-t、CLR和Cmax经对数转换后,应用方差分析法双单侧t检验及90%置信区间判断,AUC0-t和CLR90%置信区间分别为118.5%～132.5%和70.6%～82.1%,有统计学差异；Cmax90%置信区间为95.56%～106.5%,无统计学差异。结果表明丙磺舒会轻微影响人体对奈诺沙星的肾清除率,并提高该药物的系统暴露量。

全文目录

摘要  4-7
ABSTRACT  7-14
第一章前言  14-18
  1.1 沙丁胺醇背景介绍  14-16
    1.1.1 沙丁胺醇的药理作用  14
    1.1.2 沙丁胺醇生物样品分析方法  14-15
    1.1.3 气雾剂介绍  15-16
    1.1.4 生物等效性介绍  16
  1.2 奈诺沙星背景介绍  16-18
第二章 LC-MS/MS法测定人血浆中的沙丁胺醇  18-37
  2.1 实验目的  18
  2.2 实验部分  18-19
    2.2.1 药品和溶液  18
    2.2.2 仪器和设备  18-19
  2.3 质谱条件的优化  19-22
  2.4 色谱条件的优化  22
  2.5 内标的选择  22
  2.6 血浆样品预处理  22-23
  2.7 分析方法的确证  23-30
    2.7.1 方法选择性  23-25
    2.7.2 标准曲线和定量下限  25-26
    2.7.3 方法的精密度与准确度  26-27
    2.7.4 稀释试验  27
    2.7.5 基质效应考察  27
    2.7.6 血浆样品处理回收率  27-30
    2.7.7 稳定性考察  30
  2.8 分析方法在制剂生物等效性研究中的应用  30-36
    2.8.1 实验目的  30-31
    2.8.2 试验设计  31
    2.8.3 受试药品及来源  31
    2.8.4 吸入方法和血样采集  31
    2.8.5 生物样品分析及数据统计  31-32
    2.8.6 生物等效性结果评价  32-36
  2.9 讨论  36-37
    2.9.1 分析方法讨论  36-37
    2.9.2 药动学讨论  37
第三章 LC-MS/MS法测定人血浆及尿中的奈诺沙星及应用  37-62
  3.1 实验目的  37
  3.2 质谱和色谱条件的选择  37-41
    3.2.1 仪器  37-38
    3.2.2 质谱条件  38-41
    3.2.3 色谱条件  41
  3.3 样品预处理方法  41
  3.4 方法确证  41-51
    3.4.1 方法的选择性  41
    3.4.2 标准曲线和定量下限  41-44
    3.4.3 方法的精密度与准确度  44-45
    3.4.4 处理回收率  45-47
    3.4.5 基质效应  47-49
    3.4.6 稀释试验  49-50
    3.4.7 稳定性考察  50-51
    3.4.8 同服药物丙磺舒对奈诺沙星血浆样品测定的影响  51
  3.5 分析方法的应用  51-61
    3.5.1 受试者的选择  51
    3.5.2 药品及来源  51
    3.5.3 给药方案与样品采集  51-52
    3.5.4 血浆样品分析  52-53
    3.5.5 数据处理  53
    3.5.6 药动学参数及结果评价  53-61
  3.6 讨论  61-62
第四章结论  62-63
参考文献  63-67
致谢  67-68
个人简历  68
硕士在读期间发表论文情况  68-69
附图1：2号受试者吸入200 μg硫酸沙丁胺醇气雾剂参比制剂后的色谱图  69-77
附图2：2号受试者合并口服丙磺舒和奈诺沙星后的色谱图  77-85

液相色谱—串联质谱法测定生物样品中的沙丁胺醇和奈诺沙星及其应用

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