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水产品中硫酸粘菌素、杆菌肽、维吉尼霉素M₁残留量的检测方法研究

作　者: 罗方方
导　师: 吴成业
学　校: 集美大学
专　业: 农产品加工及贮藏
关键词: 硫酸粘菌素杆菌肽维吉尼霉素M1 液相色谱串联质谱法高效液相色谱-荧光检测法不确定度
分类号: TS254.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

硫酸粘菌素、杆菌肽和维吉尼霉素均属于多肽类抗生素，可抗革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌，对于一些真菌、病毒感染有很好的治疗效果。此类多肽药物常被用于预防动物疾病和促进动物生长。近些年由于多肽类抗生素的使用，对养殖水体环境造成了不可逆损伤，养殖水产品产生药物残留，进而危害养殖产业，危害人体健康。本论文研究了水产品中硫酸粘菌素、杆菌肽和维吉尼霉素M₁残留量检测的的液相色谱串联质谱法、硫酸粘菌素残留检测的高效液相色谱-荧光检测法和水样中杆菌肽残留检测的液相色谱串联质谱法。课题主要进行了以下4方面的研究：1)建立了同时检测水产品中硫酸粘菌素、杆菌肽和维吉尼霉素M₁残留量的液相色谱串联质谱法。样品经甲醇-0.1%甲酸水溶液（V/V=2/5）提取，4%三氯乙酸乙腈除蛋白，乙腈饱和正己烷除脂，过OASIS HLB小柱净化，利用液质联用仪，以选择反应监测模式检测，外标法进行定量分析。检出限分别为硫酸粘菌素10μg/kg、杆菌肽10μg/kg、维吉尼霉素M₁2μg/kg，定量限分别为20μg/kg、20μg/kg、4μg/kg；选择3个不同浓度水平做加标回收，平均回收率在72.3%～103.9%，相对标准偏差为1.10%～10.92%。最后选取7种不同水产品做验证试验，3种多肽的平均回收率为76.9%～107.5%，相对标准偏差在8.20%以内。2)建立了水样中杆菌肽残留检测的液相色谱串联质谱法。在对水中杆菌肽提取、净化条件进行分析的基础上，探讨了不同固相萃取小柱对提取效果的影响，并对固相萃取步骤进行了一系列优化，建立了最佳分析方法。方法的线性范围为5ng/mL～5000ng/mL，检出线为5ng/mL，定量限为10ng/mL。取不同地方的海水，对方法进行验证，杆菌肽的平均回收率为79.1%～99.0%，相对标准偏差为1.02%～6.69%。3)建立了水产品中硫酸粘菌素残留量检测的高效液相色谱—荧光检测法。实验研究了不同衍生化试剂的衍生化效果，对衍生化试剂的衍生化时间、衍生化pH值进行了一系列优化。同时，还研究了不同的色谱柱对分离效果的影响，确定了最佳的实验方法。经验证硫酸粘菌素在0.03ng/g～6ng/g浓度范围内线性良好（R2>0.999）,检出限为30μg/kg。选择3个浓度水平作加标回收，回收率在88.8%～97.5%范围，相对标准偏差为5.01%～6.91%；选择6种不同水产品在150μg/kg浓度水平下作加标回收，回收率在80.7%～96.0%范围，相对标准偏差在10%以内。4)分析了上述3种检测方法的不确定度来源，并对3种方法的检测结果进行了不确定度评估。经方法分析，确定了这3种方法中对检测结果影响较大的不确定度因素主要是标准曲线测量待测物浓度时引入的不确定度和样品的回收率引入的不确定度等。针对这些影响因素，在进行检测过程中应针对这几个环节，采取相应措施尽量减小不确定度对测量结果的影响增加检测结果的可信度。综上所述，本文建立了水产品中3种多肽类药物残留量检测的高效液相串联质谱法、硫酸粘菌素残留量检测的高效液相色谱-荧光检测法和水样中杆菌肽残留量检测的高效液相串联质谱法。方法样品前处理较简便、结果准确，通过验证实验，这3种方法对于该类药物的残留检测工作具有实际的参考和应用价值。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-8
目录  8-12
第1章绪论  12-21
  1.1 硫酸粘菌素、杆菌肽和维吉尼霉素 M_1概述  12-13
  1.2 渔药残留的危害与控制  13-15
  1.3 药物残留分析原理  15-16
    1.3.1 前处理技术  15-16
    1.3.2 检测技术  16
  1.4 国内外硫酸粘菌素、杆菌肽及维吉尼霉素 M_1的检测技术  16-19
    1.4.1 微生物法  16-17
    1.4.2 酶联免疫分析法（ELISA）  17
    1.4.3 毛细管电泳法  17-18
    1.4.4 高效液相色谱法  18-19
    1.4.5 液相色谱串联质谱法  19
  1.5 选题依据、目的及意义  19-21
第2章 HPLC-MS/MS 法测定水产品中硫酸粘菌素、杆菌肽及维吉尼霉素 M_1的残留量  21-32
  2.1 前言  21
  2.2 实验部分  21-23
    2.2.1 材料与试剂  21
    2.2.2 主要实验仪器  21-22
    2.2.3 标准溶液的配制  22
    2.2.4 样品制备  22
    2.2.5 样品的提取与净化  22
    2.2.6 色谱条件  22-23
    2.2.7 质谱条件  23
  2.3 结果与讨论  23-31
    2.3.1 流动相的确定  23-24
    2.3.2 色谱柱的选择  24
    2.3.3 柱温的选择  24
    2.3.4 质谱条件的优化  24-25
    2.3.5 提取方法的选择  25-26
    2.3.6 净化方法的选择  26-27
    2.3.7 样品基质效应的消除  27-28
    2.3.8 线性范围、检出限和定量限  28-29
    2.3.9 方法的准确度和精密度  29-31
  2.4 本章小结  31-32
第3章 HPLC-MS/MS 法测定水样中杆菌肽的残留量  32-41
  3.1 前言  32
  3.2 实验部分  32-35
    3.2.1 实验仪器设备  32
    3.2.2 主要材料与试剂  32-33
    3.2.3 标准溶液的配制  33
    3.2.4 样品的制备  33
    3.2.5 样品的提取与净化  33
    3.2.6 色谱条件  33
    3.2.7 质谱条件  33-35
  3.3 结果与讨论  35-39
    3.3.1 净化方法的选择  35
    3.3.2 淋洗体积和洗脱体积的选择  35-36
    3.3.3 方法的线性范围、检出限和定量  36-37
    3.3.4 方法的回收率和精密度  37-39
  3.4 本章小结  39-41
第4章高效液相色谱-荧光检测法测定水产品中硫酸粘菌素的残留量  41-49
  4.1 前言  41
  4.2 实验部分  41-43
    4.2.1 材料与试剂  41
    4.2.2 主要实验仪器  41-42
    4.2.3 标准溶液的配制  42
    4.2.4 样品的制备  42
    4.2.5 样品的提取、净化与衍生化  42
    4.2.6 色谱条件  42-43
  4.3 结果与讨论  43-47
    4.3.1 样品前处理方法的确定  43
    4.3.2 衍生化试剂的选择  43
    4.3.3 衍生化条件的选择  43-44
    4.3.4 检测方法的线性范围和检出限  44-46
    4.3.5 不同加标水平的方法回收率试验  46
    4.3.6 不同样品加标的方法回收率试验  46-47
  4.4 本章小结  47-49
第5章水产品及水样中硫酸粘菌素、杆菌肽及维吉尼霉素残留检测的不确定度分析  49-62
  5.1 前言  49
  5.2 HPLC-MS/MS 法测定水产品中硫酸粘菌素、杆菌肽及维吉尼霉素 M_1残留量的不确定度评估  49-53
    5.2.1 实验部分  49
    5.2.2 不确定度来源分析  49
    5.2.3 建立数学模型  49-50
    5.2.4 不确定度计算（以杆菌肽为例计算）  50-53
    5.2.5 不确定度的合成和扩展  53
    5.2.6 小结  53
  5.3 HPLC-MS/MS 法测定水样中杆菌肽的残留量的不确定度评估  53-57
    5.3.1 实验部分  53-54
    5.3.2 试验中不确定度来源  54
    5.3.3 建立数学模型  54
    5.3.4 不确定度计算  54-57
    5.3.5 不确定度的合成和扩展  57
    5.3.6 小结  57
  5.4 高效液相色谱-荧光检测法测定水产品中硫酸粘菌素的残留量的不确定度评估  57-61
    5.4.1 实验部分  57
    5.4.2 试验中不确定度来源  57
    5.4.3 建立数学模型  57-58
    5.4.4 硫酸粘菌素的不确定度计算  58-60
    5.4.5 不确定度的合成和扩展  60-61
    5.4.6 小结  61
  5.5 本章小结  61-62
第6章实验总结和展望  62-64
  6.1 对本实验的总结  62-63
  6.2 实验展望  63-64
致谢  64-65
参考文献  65-68
在学期间发表的学术论文  68

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