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海洋生防酵母菌对水果采后病害的生物防治

作　者: 张建垒
导　师: 孟祥红
学　校: 中国海洋大学
专　业: 生物工程
关键词: 采后病害 生物防治 海洋酵母菌 生防机理
分类号: S436.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 62次
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内容摘要


病原菌引起的水果腐烂严重制约着我国水果产业的发展。使用化学杀菌剂是防治果实采后病害常用的方法,但化学杀菌剂存在污染环境、不易分解、危害人类健康等缺点。生物杀菌剂对保护生态环境、减少食品中农药的残留、确保人体健康具有深远的意义。近年来,利用微生物进行生物防治的研究已经取得了突破性进展,被认为是最有希望替代化学杀菌剂的方法之一。海洋酵母菌能处于低温或高浓度NaCl环境中,具有耐受低温和高渗透压胁迫等优良特性,在果实采后病害的防治中可能具有独特的优势。本研究主要从以下几个方面进行:一、采用离体和活体筛选两种方式筛选出具有生防效果的海洋酵母菌。应用YPD培养基开展的生防实验,发现61种菌株中标号为DG-1、SA-1、M-1、NH- 1、NJB-1、ZZF、HZ-9、PA-1、W-1的9株酵母菌株对灰霉(Botrytis cinerea)的抑制效果明显。标号为DG-1、HZ-2、SA-1、NH-1、ZZF、HF-2、HH-3的7株酵母菌对褐腐病菌(Monilinia fructicola (G. Wint.) Honey)的抑制效果明显。其中其中标号为DG-1、SA-1、ZZF、和NH-1的酵母菌株对灰霉(B. cinerea)和褐腐(M. fructicola)都具有显著抑菌效果。将上述初筛出来的4株酵母菌,进行活体实验时发现,编号为DG-1的菌株的生防效果远远高于编号为DG-1、SA-1、ZZF和NH-1的酵母菌株,能显著降低果实发病率。二、研究了海洋酵母菌DG-1对病害的防治效果。实验结果显示编号为DG-1的海洋酵母菌菌液浓度与桃果实的腐烂程度成反比,且海洋酵母菌DG-1的菌液浓度与果实的发病率和病斑直径存在相关性。但海洋酵母菌DG-1对灰霉(B. cinerea)孢子萌发率的影响效果并不明显,并不能完全抑制孢子的萌发出芽。此外,研究发现海洋酵母菌DG-1在PDA培养基上对灰霉(B. cinerea)的抑制效果要比在YPD培养基上强。三、分别从形态学及生理生化特征上对编号为DG-1的海洋酵母菌菌株进行了鉴定,实验结果显示此菌株和出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)最为相似。此外,本文还分别对此酵母菌进行了18sRNA及ITS亲缘关系鉴定,其鉴定结果与形态及生理生化反应鉴定的结果一致,可初步鉴定海洋酵母菌株DG-1为出芽短梗霉(A. pullulans)。四、通过对出芽短梗霉(A. pullulans)生防机理的初步探究,发现出芽短梗霉(A. pullulans)的悬液对灰霉(B. cinerea)的抑制效果最显著,但出芽短梗霉(A. pullulans)的热处理液和超滤上清液对病菌均无明显的抑制作用,初步证明出芽短梗霉(A. pullulans)滤液中不存在可以抑制灰霉(B. cinerea)的有效物质。本实验初步认为出芽短梗霉(A. pullulans)的生防机制为营养竞争型。五、对出芽短梗霉(A. pullulans)生长培养条件的研究结果显示,发现出芽短梗霉(A. pullulans)对酸碱度有很强的耐受性,尤其是在碱性条件下能快速生长。本研究发现出芽短梗霉(A. pullulans)在盐度为0、温度为25℃、培养时间为36h时生长最旺盛。本实验从现有61株海洋酵母菌株中筛选出一株生防效果显著的菌株,揭示了出芽短梗霉(A. pullulans)对病害的防治效果,初步鉴定为出芽短梗霉(A. pullulans),并初步探究了出芽短梗霉(A. pullulans)的生防机理为营养竞争型,并优化了其生长条件。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-12
0 前言  12-26
  0.1 我国水果产业现状  12-13
    0.1.1 水果常见病害  12-13
  0.2 目前控制采后果实病害常用方法  13-15
    0.2.1 物理方法  13-14
    0.2.2 化学方法  14
    0.2.3 生物防治  14-15
  0.3 酵母菌的生防机理  15-18
    0.3.1 营养或者空间竞争  15-16
    0.3.2 诱导寄主产生抗性  16-17
    0.3.3 寄生作用  17
    0.3.4 产生抗生素或类抗生素的物质  17-18
  0.4 提高酵母菌生防效果的途径  18-21
    0.4.1 与化学杀虫剂相结合  18-19
    0.4.2 生物生防菌混合使用  19
    0.4.3 使用佐剂  19
    0.4.4 加入金属离子  19-20
    0.4.5 利用分子技术对生防菌株进行遗传改良  20-21
    0.4.6 诱导植物自身的抗性  21
  0.5 生防菌的来源和筛选  21-23
  0.6 生物防治的问题现状和前景  23-24
    0.6.1 现存问题  23-24
    0.6.2 发展前景  24
  0.7 本实验目的和研究内容  24-26
1 海洋生防酵母菌的分离和筛选  26-32
  1.1 实验仪器  26
  1.2 实验材料  26-27
  1.3 实验方法  27-28
    1.3.1 离体筛选生防酵母  27-28
    1.3.2 活体筛选生防酵母菌  28
  1.4 结果和讨论  28-30
  1.5 小结  30-32
2 海洋酵母菌 DG-1 的生防效果  32-37
  2.1 实验器材  32
  2.2 实验材料  32-33
  2.3 实验方法  33-34
    2.3.1 海洋酵母菌DG-1 悬浊液的生防效果  33
    2.3.2 海洋酵母菌DG-1 对灰霉病菌孢子（B. cinerea）萌发率的影响  33
    2.3.3 不同培养基上海洋酵母菌DG-1 对灰霉菌丝扩展的影响  33-34
  2.4 实验结果与讨论  34-36
    2.4.1 不同浓度的酵母悬浮液的生防效果  34-35
    2.4.2 海洋酵母菌DG-1 对孢子灰霉（B. cinerea）萌发率的影响  35
    2.4.3 不同培养基上海洋酵母菌DG-1 对灰霉菌丝扩展的影响效果  35-36
  2.5 小结  36-37
3 海洋酵母菌的鉴定  37-46
  3.1 实验仪器  37
  3.2 实验材料  37-38
  3.3 实验方法  38-40
    3.3.1 观察海洋酵母菌的菌落形态  38
    3.3.2 观察海洋酵母菌的菌体形态  38
    3.3.3 糖类发酵实验  38
    3.3.4 唯一碳源利用  38
    3.3.5 提取酵母基因组DNA  38-39
    3.3.6 酵母菌分子生物学鉴定  39-40
  3.4 结果与讨论  40-44
    3.4.1 海洋酵母菌菌落和菌体形态  40
    3.4.2 糖类发酵实验  40-41
    3.4.3 唯一碳源利用结果  41
    3.4.4 分子生物学鉴定结果  41-44
  3.5 小结  44-46
4 出芽短梗霉（A. pullulans）的生防机理的初步探究  46-51
  4.1 实验仪器  46
  4.2 实验材料  46-47
  4.3 实验方法  47-48
    4.3.1 不同处理方法的出芽短梗霉（A. pullulans）对桃灰霉病的抑制影响  47-48
    4.3.2 出芽短梗霉（A. pullulans）超滤液的对灰霉菌丝扩展的抑制影响  48
  4.4 结果与讨论  48-50
    4.4.1 不同处理的出芽短梗霉（A. pullulans）对桃灰霉病菌抑制的效果  48-49
    4.4.2 出芽短梗霉（A. pullulans）超滤液的对灰霉菌丝扩展的抑制效果  49-50
  4.5 小结  50-51
5 出芽短梗霉（A. pullulans）生长条件的优化  51-56
  5.1 实验仪器  51
  5.2 实验材料  51
  5.3 实验方法  51-53
    5.3.1 出芽短梗霉（A. pullulans）在不同酸碱度条件下的生长效果  51-52
    5.3.2 出芽短梗霉（A. pullulans）在不同时间条件下的生长效果  52
    5.3.3 出芽短梗霉（A. pullulans）在不同盐度条件下的生长效果  52
    5.3.4 出芽短梗霉（A. pullulans）在不同温度条件下的生长效果  52-53
  5.4 结果与讨论  53-55
    5.4.1 出芽短梗霉（A. pullulans）在不同酸碱度条件下的生长效果  53
    5.4.2 出芽短梗霉（A. pullulans）在不同时间条件下的生长效果  53-54
    5.4.3 出芽短梗霉（A. pullulans）在不同盐度条件下的生长效果  54
    5.4.4 出芽短梗霉（A. pullulans）在不同温度条件下的生长效果  54-55
  5.5 小结  55-56
6 全文总结和讨论  56-57
7 主要创新点  57
8 存在不足及可持续研究  57-58
参考文献  58-65
致谢  65-66
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果  66

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 园艺作物病虫害及其防治 > 果树病虫害
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