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舒血宁注射液对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

作　者: 曹秋红
导　师: 李汶霞
学　校: 泰山医学院
专　业: 老年医学
关键词: 舒血宁 脐静脉内皮细胞细胞 氧化低密度脂蛋白 细胞间黏附因子-1 单核细胞趋化蛋白-1
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


研究目的本实验通过体外培养人脐静脉内皮细胞( human umbilical vein endothelial cells HUVEC)原代及传代培养的方法,并对所培养细胞进行鉴定;利用氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein ox-LDL)对所培养的HUVEC造成脂质过氧化损伤,观察舒血宁注射液对内皮细胞的保护作用并探讨其可能的作用机制。研究方法取新鲜脐带的静脉内皮细胞进行体外原代及传代培养,并对所培养的细胞进行鉴定;建立脂质过氧化损伤模型,以加药的不同分为:空白对照组、ox-LDL损伤组、舒血宁加ox-LDL组(将细胞用舒血宁注射液预处理24h,然后加入ox-LDL)、生理盐水加ox-LDL组(将细胞用生理盐水预处理24h,然后加入ox-LDL)。采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞相对数和相对活力;用酶联免疫吸附测定法(ELISA)观察ox-LDL刺激在0h、3h、12h、24h时,对内皮细胞ICAM-1、MCP-1的蛋白质水平的影响,用蛋白质免疫印记技术(Western Blot)观察ox-LDL刺激12h时对人脐静脉内皮细胞ICAM-1、MCP-1蛋白质水平的影响;以及用舒血宁注射液干预后上述因子的变化。根据其结果分析舒血宁注射液对血管内皮细胞的保护作用及其可能的作用机制。所有量化数据均采用SPSS13.0软件进行分析。研究结果(1) MTT法检测内皮细胞相对数和相对活力:ox-LDL与HUVEC共同孵育24h后其HUVEC的活性降低,其OD值与对照组相比显著下降(P<0.01),舒血宁注射液组的OD值明显高于ox-LDL组(p<0.01);生理盐水组与ox-LDL损伤组比较无统计学意义(P>0.05)。测得ox-LDL损伤组细胞存活率为50.41±0.002%,与空白对照组相比显著下降(p<0.01);舒血宁注射液组为81.82±0.001%,与ox-LDL损伤组比较有显著性差异(p<0.01);生理盐水组为49.59±0.014%,与ox-LDL损伤组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)舒血宁注射液对ox-LDL处理的HUVEC形态学的影响:在倒置显微镜下观察,空白对照组的HUVEC呈单层,其边界清楚,胞质丰富,互不重叠,成典型的铺路石样镶嵌排列;在与ox-LDL共同孵育以后其细胞收缩,细胞间隙增宽,细胞膜皱缩,可见有部分细胞脱落,细胞的边界不清楚;舒血宁注射液组的细胞形态趋于正常,其间隙变窄,但与正常相比仍有差异,;生理盐水组细胞间隙增宽,细胞膜收缩,部分细胞脱落。(3)舒血宁对ox-LDL诱导HUVEC ICAM-1和MCP-1蛋白质表达的影响酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测ox-LDL诱导的HUVEC中ICAM-1、MCP-1蛋白质表达增加,给予舒血宁注射液干预后其蛋白质表达降低。检测显示ox-LDL刺激后在各个时间点ICAM-1、MCP-1表达均有所增高,差异有显著性(P<0.01),3h、6h、12h、24h各时间点与空白对照组相比,ICAM-1水平分别提高28.9%、44.7%、89.9%、81.9%, MCP-1水平分别提高30.7%、57.9%、130%、120%,其中以12h组增高最为明显;与ox-LDL损伤组比较,给予舒血宁注射液后ICAM-1、MCP-1表达在各时间点均有所下降,ICAM-1在3h、6h、12h、24h各时间点分别下降7.13%、13.2%、27.5%、51.9% ;MCP-1在3h、6h、12h、24h各时间点分别下降10.7%、9.93%、47%、57.6%;而给予生理盐水后与ox-LDL损伤组相比差异不明显,无统计学意义。Western Blot蛋白印记分析法显示:与空白对照组相比在ox-LDL刺激HUVEC后可使其炎症因子ICAM-1、MCP-1蛋白质表达明显上调,与ox-LDL损伤组相比给予舒血宁注射液后ICAM-1、MCP-1的蛋白质表达明显下调,差异有显著性(P<0.01);而给予生理盐水后与ox-LDL损伤组相比差异不明显,无统计学意义。结论(1) ox-LDL对HUVEC有细胞毒性作用,可抑制细胞生长,并且可引起内皮细胞形态结构的改变;(2)舒血宁注射液对ox-LDL诱导的HUVEC形态学有抑制作用;且可以提高ox-LDL氧化损伤HUVEC细胞的存活率;(3) ox-LDL作用于HUVEC可上调ICAM-1、MCP-1蛋白质的表达,而舒血宁注射液对ox-LDL诱导的HUVEC ICAM-1、MCP-1表达改变有一定的逆转作用,而起到对血管内皮细胞的保护作用,从而预防AS的发生。

全文目录


中文摘要  4-7
英文摘要  7-10
符号说明  10-12
前言  12-14
第一部分  14-34
  中文摘要  14-16
  英文摘要  16-18
  前言  18-19
  材料与方法  19-23
  结果  23-25
  讨论  25-29
  结论  29-30
  附图表  30-32
  参考文献  32-34
第二部分  34-66
  中文摘要  34-36
  英文摘要  36-38
  前言  38-40
  材料与方法  40-47
  结果  47-48
  讨论  48-58
  结论  58-59
  附图表  59-62
  参考文献  62-66
致谢  66

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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