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循环MicroRNA在急性心肌梗死早期诊断的研究

作　者: 孙传峰
导　师: 魏云峰
学　校: 南昌大学
专　业: 内科学
关键词: 急性心肌梗死血清 microRNA 实时定量RT-PCR
分类号: R542.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：越来越多的研究表明microRNA存在人类血液循环中,并且可作为一种新的生物标志物用于疾病诊断,本研究采用荧光定量PCR方法,通过检测急性心肌梗死患者、心绞痛患者(除外AMI)、健康人群血清中miR-208、miR-214、miR-21表达量的差异,探讨血清miRNA作为急性心肌梗死早期诊断和预后生物学标记物的可能性,并为进一步实验研究miRNA基因在心肌梗死发展过程中的作用及基因治疗奠定基础。方法：收集急性心肌梗死患者血清38例(所有血清样本采血前均未行任何治疗)、心绞痛组25例及健康人20例,提取血清总RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测相关microRNA的表达量,并对各组间相关miRNA进行统计学分析。用Gensini评分系统对冠状动脉病变程度进行分组,A组11例(总积分≤30分)；B组15例(总积分31-90分)；C组12例(总积分>90分),分析冠状动脉病变程度与miRNA表达水平的关系,同时检测心肌损伤标志物CK-MB的变化,并对目的miRNA与CK-MB进行相关性分析。结果：(1)、急性心肌梗死患者血清中miR-208、miR-214的表达明显高于心绞痛组及健康组(P<0.05)。miR-21表达低于健康组(P＜0.05); (2)、miR-208、miR-214在冠心病组表达高于健康组,但无明显统计学差异(P>0.05),miR-21表达低于健康组(P<0.05)。(3)Gensini低积分组miRNA水平较高积分组偏低(P<0.05)。(4)目的miR-208、miR-214的表达水平与CK-MB呈正相关(r=0.81,0.73),而miR-21表达与CK-MB呈负相关(r=-0.6)。结论：本实验所筛选出的心肌特异性的miRNA基因通过荧光定量RT-PCR技术进行验证,发现AMI患者血清中miRNA208及miR214表达水平较健康组上调。揭示miRNA可能是心肌梗死早期诊断的一种新的候选生物标志物。对AMI组与健康组miRNA水平进行统计学检验,结果显示血清中miRNA的表达水平与冠状动脉病变严重程度关系相关,其表达水平可反映心肌梗死病变程度。实验结果提示心肌细胞特异性的miRNA可作为一类新的生物标志物用于临床疾病的早期诊断及治疗评估。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-9
第1章前言  9-12
第2章对象和材料  12-15
  2.1 血液样本来源  12
    2.1.1 血液样本来源  12
    2.1.2 入选标准  12
  2.2 主要仪器及材料  12-13
  2.3 试剂及其来源  13
  2.4 引物合成  13-15
第3章实验方法  15-19
  3.1 Gensini评分系统  15-16
  3.2 血清样本处理  16
  3.3 血清总RNA提取  16-17
  3.4 总RNA的OD值检测  17
  3.5 总RNA反转录为cDNA  17
  3.6 实时荧光定量PCR  17-18
  3.7 统计学分析  18-19
第4章实验结果  19-25
  4.1 荧光实时定量RT-PCR检测各组血清miR-208表达的变化  19-20
  4.2 imR-12在AMI患者及对照组血清中的表达情况  20-21
  4.3 血清中miR-214相对表达情况  21-23
  4.4 血清miRNA表达水平与冠状动脉狭窄程度的关系  23-24
  4.5 血清miRNA表达水平与心肌损伤标志物CK-MB的相关性分析  24-25
第5章讨论  25-29
  5.1 miRNA研究背景  25-26
  5.2 miRNA与心肌梗死  26-27
  5.3 Gensini评分系统  27
  5.4 microRNA作为心肌损伤标志物  27
  5.5 miRNA的检测技术  27-29
第6章结论与展望  29-30
  6.1 结论  29
  6.2 展望  29-30
致谢  30-31
参考文献  31-35
综述  35-40
  参考文献  39-40

循环MicroRNA在急性心肌梗死早期诊断的研究

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