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香蕉枯萎病生防放线菌综合防控初步研究

作　者: 李松伟
导　师: 黄俊生
学　校: 海南大学
专　业: 农业生物技术
关键词: 香蕉枯萎病 拮抗放线菌 有益菌群 标记存活 发酵优化 盆栽试验 小区试验 防治效果
分类号: S436.68
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


香蕉枯萎病是由土壤真菌尖镰孢古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp. cubense)引起的维管束系统性病害。在我国广大香蕉种植区均有发病,其发病传染迅速且极难防治,对我国的香蕉产业造成巨大的危害。本论文以生防放线菌防治香蕉枯萎病为实验课题,通过海南、广东、四川等地采集土壤样品和植株样品,进行拮抗香蕉枯萎病菌的生防放线菌的分离筛选,进一步与其他有益生防菌的对峙试验,筛选出两株拮抗活性强、稳定性高且与其他生防菌能共存的生防放线菌H1001和H1010菌株,以该菌为研究对象,对其进行鉴定、标记、存活、发酵及盆栽和小区防治效果进行研究,主要试验如下：(1)从海南,广州,云南,四川香蕉枯萎病发病地块、废弃荒地、山区有机质丰富、河流泥塘等地采集土壤以及香蕉植株组织样品中,进行常见放线菌,稀有放线菌的分离与纯化,得到放线菌305株。通过平板对峙和发酵产物拮抗香蕉枯萎病菌4号生理小种实验,筛选出具有较强拮抗活性生防放线菌26株,进一步做与其他生防菌的共存实验,筛选出目的放线菌2株,命名为H1001和H1010；该两个菌株对不同枯萎病菌专化型也有一定的抑制作用。(2)通过对菌株H1001和1010进行培养,观察其形态特征,测定其生理生化特性、提取菌株DNA,进行16S rDNA的测定及系统发育分析研究,初步确定菌株H1001为链霉菌属(Streptomyces)、菌株1010为拟无枝酸菌属(Amycolatopsis)。(3)为了提高生防菌株发酵液中活菌及抑制活性物的含量,通过培养基质的选择,不同碳、氮源实验优化,发酵条件的优化,获得菌株在三角摇瓶和发酵罐的发酵优化结果：菌株H1001选用碳源1%的葡萄糖、氮源2%大豆粉、PH7、接种量为2%、28-30℃温度下培养以及发酵4天为最优组合；菌株H1001为碳源1.5%的葡萄糖、氮源2%大豆粉、PH8、接种量为2%、30℃温度下培养以及发酵4天为最优组合。(4)为了了解生防菌的存活习性和在不同介质中的变化规律,对生防菌株进行抗生物质的标记,从而确定两株放线菌H1001、H1010在不同介质中的存活规律,第7天表现为大量消减,在第42天基本消失殆尽,而生防菌株芽孢杆菌与生防木霉菌在有机质中存活能力较强。(5)盆栽和小区试验表明：生防菌株组成的生防复合菌剂,在香蕉枯萎病的防治中,具有良好的效果,香蕉抗(耐)枯萎病品种种植,土壤消毒处理以及生防菌肥、菌剂的使用,是防治香蕉枯萎病的有效途径,本实验中巴西蕉种植地块防治效果为26.41%；抗(耐)病品种“农科一号”防治效果达到47.79%。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-12
第一章: 文献综述  12-22
  1 香蕉枯萎病的研究进展  12-16
    1.1 香蕉枯萎病概述  12-13
    1.2 香蕉枯萎病防治研究进展  13-16
      1.2.1 抗病品种  13-14
      1.2.2 检验检疫  14
      1.2.3 栽培管理  14-15
      1.2.4 化学防治  15
      1.2.5 生物防治  15-16
  2 放线菌在生物防治中的研究进展  16-20
    2.1 放线菌的拮抗机制  16-17
      2.1.1 抗生机制  16-17
      2.1.2 竞争机制  17
      2.1.3 重寄生作用  17
    2.2 放线菌的生防作用  17-18
      2.2.1 活体制剂的直接利用  17-18
      2.2.2 抗生素的利用  18
    2.3 放线菌在生防中的问题和解决途径  18-20
      2.3.1 有益放线菌的分离筛选  18-19
      2.3.2 放线菌活菌制剂  19-20
      2.3.3 放线菌抗生素的应用  20
  3 研究目的意义、内容及方法  20-22
    3.1 目的意义  20
    3.2 研究内容  20-21
    3.3 技术路线  21-22
第二章: 香蕉枯萎病生防放线菌的分离、筛选及鉴定  22-36
  1 材料与方法  22-27
    1.1 试验材料  22-23
      1.1.1 供试土壤  22
      1.1.2 供试试剂  22-23
      1.1.3 主要仪器设备  23
      1.1.4 主要培养基  23
    1.2 实验方法  23-27
      1.2.1 放线菌的分离  23-24
      1.2.2 目的放线菌的筛选  24-26
        1.2.2.1 拮抗镰刀菌枯萎病放线菌的筛选  24
        1.2.2.2 放线菌与有益菌的对持筛选实验  24-25
        1.2.2.3 拮抗放线菌抑菌谱的测定  25-26
      1.2.3 放线菌的鉴定  26-27
        1.2.3.1 培养特征及生理生化特性  26
        1.2.3.2 分子测定  26-27
  2 结果与分析  27-35
    2.1 放线菌的分离  27-31
      2.1.1 拮抗枯萎病菌的放线菌筛选  28-29
      2.1.2 与有益菌互不拮抗的筛选  29-30
      2.1.3 拮抗放线菌抑菌谱的测定  30-31
    2.4 放线菌的鉴定  31-35
      2.4.1 形态学特征  31-32
      2.4.2 放线菌生理生化特性  32-33
      2.4.3 放线菌16S rDNA序列测定及系统发育分析  33-35
        2.4.3.1 16S rDNA基因扩增产物  33
        2.4.3.2 系统发育分析  33-35
  3 结论与讨论  35-36
    3.1 结论  35
    3.2 讨论  35-36
第三章: 放线菌的标记、存活、发酵试验  36-59
  1 材料与方法  36-42
    1.1 试验材料  36-37
      1.1.1 主要试剂  36
      1.1.2 主要仪器设备  36
      1.1.3 主要培养基  36-37
    1.2 试验方法  37-42
      1.2.1 放线菌抗生素标记  37
      1.2.2 放线菌存活试验  37-39
        1.2.2.1 放线菌在不同的介质中的存活  37-38
        1.2.2.2 放线菌在有机肥中的存活  38-39
      1.2.3 放线菌优化发酵  39-42
        1.2.3.1 放线菌菌株液体优化发酵  39-41
        1.2.3.2 放线菌菌株固体优化发酵  41-42
  2 结果与分析  42-58
    2.1 放线菌抗生素标记  42-44
    2.2 放线菌存活试验  44-48
      2.2.1 放线菌在不同的介质中的存活  44
      2.2.2 生防有益菌在有机肥中的存活  44-48
        2.2.2.1 生防细菌在有机肥中的存活  45
        2.2.2.2 生防放线菌在有机肥中的存活  45-46
        2.2.2.3 生防木霉菌在有机肥中的存活  46
        2.2.2.4 生防拟青霉菌在有机肥中的存活  46-47
        2.2.2.5 生防菌群在有机肥中的存活  47-48
    2.3 放线菌优化发酵  48-58
      2.3.1 放线菌菌株液体优化发酵  48-55
        2.3.1.1 三角摇瓶液体发酵优化  48-53
        2.3.1.2 发酵罐液体发酵优化  53-55
      2.3.2 放线菌菌株固体优化发酵  55-58
        2.3.2.1 小剂量大米基质固体发酵优化  55-57
        2.3.2.2 大剂量甘蔗渣基质固体发酵试验  57-58
  3 结论与讨论  58-59
    3.1 放线菌存活试验  58
    3.2 放线菌发酵试验  58-59
第四章: 生防放线菌在香蕉枯萎病防治中的应用  59-68
  1 材料与方法  59-62
    1.1 试验材料  59
    1.2 盆栽试验方法  59-61
      1.2.1 盆栽试验预处理  59
      1.2.2 盆栽试验方案  59-60
      1.2.3 盆栽试验病情调查方法  60-61
    1.3 小区试验方法  61-62
      1.3.1 处理方案  61
      1.3.2 试验种植步骤  61
      1.3.3 小区试验病情调查方法  61-62
  2 结果与分析  62-67
    2.1 盆栽试验结果  62-64
      2.1.1 盆栽试验发病统计  62-63
      2.1.2 盆栽试验土壤枯萎病菌浓度变化规律  63-64
    2.2 小区试验结果  64-67
      2.2.1 小区试验发病统计  64-66
      2.2.2 小区试验土壤枯萎病菌浓度变化规律  66-67
  3 结论与讨论  67-68
    3.1 结论  67
    3.2 讨论  67-68
参考文献  68-76
后记  76

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 园艺作物病虫害及其防治 > 果树病虫害 > 多年生草本果类病虫害
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