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海洋鱼类细菌性病原微生物GAPDH蛋白的定位和功能初步研究

作　者: 李小勇
导　师: 吴海珍
学　校: 华东理工大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 病原菌 GAPDH 定位 保护性抗原 黏附
分类号: S941
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 48次
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内容摘要


三磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphata dehydrogenase, GAPDH)一直是糖酵解过程的重要研究角色,作为一个含量丰富的胞内蛋白质,其已成为一个实用模型,用于研究酶作用机制以及氨基酸序列与蛋白质结构的相互关系。然而最近几年的研究表明,GAPDH不是一个纯粹简单的糖酵解蛋白。相反,各种微生物当中的GAPDH显示出不同的生物学活性,越来越受到人们的重视。本论文在对海洋鱼类病原微生物GAPDH蛋白的定位研究中,成功克隆了六种病原菌GAPDH编码基因,并实现了六个基因在大肠杆菌中的重组表达；进一步制备了迟钝爱德华氏菌EIB202重组蛋白GAPDH的多克隆抗体；在此基础上通过Western blotting、间接免疫荧光观察、流式细胞仪分析等,发现选取的六种鱼类重要病原菌迟钝爱德华氏菌、鲶鱼迟钝爱德华氏菌、嗜水气单孢菌、鳗弧菌、溶藻弧菌和哈维氏弧菌中GAPDH蛋白均有向胞外分泌,同时细胞表面也有分布。而以斑马鱼为实验对象的GAPDH重组蛋白相对免疫保护率分析表明,来源于不同病原菌的重组蛋白均具有明显的免疫保护作用,且相互间有一定的交叉免疫保护。最后分析了迟钝爱德华氏菌EIB202的GAPDH过表达菌株对EPC细胞的侵染能力,结果发现GAPDH与病原菌的黏附有一定的相关性。上述研究结果的取得为未来利用GAPDH蛋白作为广谱型保护性抗原蛋白,开发针对养殖水体多病原的亚单位疫苗提供了优选靶标,而迟钝爱德华氏菌中GAPDH蛋白功能的初步分析,则为后续其在鱼类致病机制中的功能研究奠定了基础。

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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产保护学 > 鱼病学
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