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~(131)I-K237的制备及在体外对前列腺癌细胞影响的实验研究

作　者: 张瑜
导　师: 李娟; 陈跃
学　校: 宁夏医科大学
专　业: 影像医学与核医学
关键词: 多肽K237 131I标记 Iodogen法 前列腺癌 细胞凋亡
分类号: R737.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：探索131I标记多肽K237，获得放射化学纯度高于95%的131I-K237的最佳条件，研究标记产物的体外稳定性及生物学活性。研究鉴定131I-K237对前列腺癌LNCaP细胞的体外治疗作用。方法：应用Iodogen法对K237进行131I标记，采用正交实验筛选最佳标记条件。用高效液相色谱仪（HPLC）联合薄层层析法（TLC）测定标记率及放射化学纯度，Sephadex G25凝胶层析柱分离纯化131I-K237。将分离纯化的131I-K237（放射化学纯度大于95％）分别放置于室温及37℃水浴箱，于不同时间测定其放射化学纯度以观察其稳定性。应用CCK-8法进行人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖抑制实验，分别计算K237及131I-K237对HUVEC的抑制率，判定131I-K237的生物学活性。体外培养前列腺癌LNCaP细胞，分别加入不同放射性活度131I-K237、相同浓度K237和空白对照组干预48h后，应用光学显微镜、荧光显微镜、核酸凝胶电泳、流式细胞分析来鉴定131I-K237对LNCaP细胞的治疗作用。结果：最佳标记条件中，K237100μg与Iodogen50μg，在37℃条件下反应时间40min，标记率可达70%以上。经Sephadex G25层析柱分离纯化后，放射化学纯度可达95%以上。稳定性实验结果表明，131I-K237在体外放置24h后，其放射化学纯度任>90%。131I-K237和K237对HUVEC细胞增殖的抑制率差异无统计学意义（P>0.05），说明K237被131I标记后，其生物学活性未发生改变。131I-K237对LNCaP细胞治疗作用鉴定结果：光镜下可以观察到凋亡细胞形态。荧光显微镜下凋亡细胞呈团状或碎块状致密浓染的蓝色强荧光。 DNA电泳为典型的“阶梯状”条带。流式细胞分析结果131I-K237与K237都对LNCaP细胞具有诱导凋亡作用，但131I-K237的诱导作用明显高于K237，且凋亡率与加入131I-K237放射性活度呈正相关。结论：Iodogen法131I标记多肽K237简单高效，标记产物的生物活性得到保留，未受明显破坏。131I-K237对LNCaP细胞治疗作用显著，为131I-K237后期的动物实验与临床应用作铺垫。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
前言  10-13
第一部分 ~(131)I 标记多肽 K237 的最佳条件及标记肽体外生物学活性的实验研究  13-26
  引言  13-14
  材料与方法  14-18
  结果  18-24
  讨论  24-26
第二部分 ~(131)I-K237 在体外对前列腺癌 LNCaP 细胞治疗作用的实验研究  26-39
  引言  26-27
  材料与方法  27-31
  结果  31-36
  讨论  36-39
结论  39-41
参考文献  41-43
综述  43-53
  参考文献  49-53
致谢  53-54
攻读学位期间公开发表的论文目录  54

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 男性生殖器肿瘤 > 前列腺肿瘤
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