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HBx对SOCS-1 CpG岛甲基化及其表达的影响

作　者: 宋晓玲
导　师: 刘国珍
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: HBV-X 乙型肝炎病毒细胞因子信号转导抑制分子-1 甲基化
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：观察H13x对人源性非瘤性肝细胞株QSG7701细胞中细胞因子信号转导抑制分子-1(SOCS-1)启动子区CpG岛甲基化及其表达的影响,以探讨HBx致肝细胞癌变的可能机制。方法：本研究室前期构建好的重组表达质粒pcDNA-X及空载体pcDNA3.0分别转染QSG7701细胞,经含G418的选择性培基筛选获得稳定转染HBV-X基因的细胞克隆(pcDNA-X/QSG7701)及稳定转染空载体pcDNA3.0的细胞克隆(pcDNA3.0/QSG7701)。RT-PCR、 Western blot分别检测三种细胞HBx mRNA及HBx蛋白的表达情况。Real-time PCR、Western blot分别检测3种细胞SOCS-1mRNA及蛋白的表达情况。甲基化特异性PCR法(MSP)检测三种细胞SOCS-1基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果：RT-PCR、Western blot检测结果显示转染了X基因的QSG7701细胞中有HBx mRNA及蛋白的表达,转染了空质粒的pcDNA3.0/QSG7701及QSG7701无HBx mRNA及蛋白的表达。Real-time PCR、Western blot检测结果显示pcDNA-X/QSG7701中SCOS-1mRNA和蛋白表达水平明显低于与pcDNA3.0/QSG7701及未转染的细胞QSG7701(P<0.05)。MSP结果显示转染了含X基因重组质粒的QSG7701细胞中发现SOCS-1启动子区CpG岛甲基化,转染了对照空质粒的pcDNA3.0/QSG7701和未转染的QSG7701细胞株中未发现SOCS-1启动子区CpG岛甲基化。结论：乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)在mRNA及蛋白水平下调了SOCS-1基因的表达,并使SOCS-1启动子区CpG岛发生甲基化,这可能是HBx致肝细胞癌变的机制之一。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
英汉縮略词对照表  9-10
第一章前言  10-12
第二章材料与方法  12-25
  2.1 材料  12-13
  2.2 实验方法  13-24
  2.3 统计学分析  24-25
第三章结果  25-29
  3.1 RT-PCR检测PcDNA-X/QSG7701细胞中X基因MRNA的表达  25
  3.2 WESTERNBLOT检测转染细胞中HBx蛋白的表达  25-26
  3.3 REAL TIME-PCR检测三种细胞中SOCS-1 MRNA表达情况  26-27
  3.4 WESTERN BLOT检测三种细胞中SOCS-1蛋白表达情况  27-28
  3.5 甲基化特异性PCR(MSP)法检测SOCS-1启动子区CPG岛甲基化情况  28-29
第四章讨论  29-32
第五章结论  32-33
参考文献  33-36
综述  36-45
  参考文献  42-45
致谢  45-46
攻读学位期间发表的文章  46

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