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miR-10a通过靶定基质金属蛋白酶14（MMP14）参与结肠癌转移的调控

作　者: 张英楠
导　师: 汤华
学　校: 天津医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 转移侵袭微小RNA miR-10a 基质金属蛋白酶14 靶基因
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的：肿瘤转移是多基因参与、多步骤完成的复杂生命现象,其发生的隐蔽性和不可预测性是肿瘤患者治疗过程中最重要的难题,也是威胁肿瘤患者生命的最重要原因。目前,对于其发生机制的研究已经取得了很多成就,microRNA(miRNA)的发现又使这一领域的研究有所扩展。miRNA属于小RNA分子家族,能够通过与3’非翻译区带有互补序列的靶基因互补结合,引起靶基因mRNA的降解或翻译抑制,从而发挥对靶基因表达的调控作用。研究发现,miRNA的调节作用涵盖了生长发育、细胞凋亡、造血细胞分化、脂肪代谢等多种生命现象。在肿瘤组织中,也存在miRNA的差异表达,提示人们miRNA可能参与肿瘤的某些生物学特性的形成。生物信息学方法预测,肿瘤中差异表达的miRNA所对应的靶基因中包括了参与肿瘤转移的多种重要分子。此研究的目的即探寻是否miRNA参与了肿瘤转移的调控过程,这一调控过程是通过哪些基因实现的。方法：本实验室采用基因芯片的技术,筛选到在两种转移能力不同的结肠癌细胞系中表达存在差异的miRNA,即miR-10a。为明确miR-10a是否与两种细胞系转移能力的差别有关,我们采用了侵袭实验来检测封闭掉miR-10a后,细胞侵袭能力的变化。在确认miR-10a与肿瘤侵袭表型相关之后,我们将通过生物信息学方法预测的miR-10a的靶基因与参与肿瘤转移过程的几类基因进行对比,发现预测的靶基因中,MMP14是在肿瘤转移过程中发挥巨大作用的成员之一。在接下来的实验中,我们构建了带有MMP14的3’UTR miR-10a靶位点的报告基因载体,在三种细胞系中检测miR-10a对报告基因表达水平的影响,从而验证生物信息学方法预测的MMP14是否为miR-10a的靶基因。此后,又通过RT-PCR和Western Blot方法检测了miR-10a对细胞中MMP14的mRNA和蛋白水平的影响。为探讨miR-10a在体内复杂环境中是否能够抑制高转移细胞系转移瘤的形成,我们通过裸鼠脾内注射高转移结肠癌细胞,观察miR-10a对肝表面转移瘤形成的影响。结果：侵袭实验结果表明,封闭掉miR-10a的低转移结肠癌细胞系转移能力显著增强。报告基因载体实验表明miR-10a能够抑制带有MMP14靶位点的报告基因表达载体的表达。RT-PCR和Western Blot方法表明含有miR-10a的低转移结肠癌细胞系中的MMP14表达水平低于封闭掉miR-10a的低转移细胞系和本身不含有miR-10a的高转移细胞系。裸鼠体内实验结果表明转染miR-10a后,高转移结肠癌细胞系形成转移瘤的能力有所降低。结论：miR-10a是抑制结肠癌细胞转移的重要miRNA,其发挥调节作用的方式可能为调节MMP14的表达。miR-10a能够一定程度上抑制结肠癌细胞系肝脏表面转移瘤的形成。

miR-10a通过靶定基质金属蛋白酶14（MMP14）参与结肠癌转移的调控

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