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活化星形胶质细胞NGF、IL-6表达的时间特性

作　者: 陈新华
导　师: 谢明
学　校: 南华大学
专　业: 内科
关键词: 星形胶质细胞活化胶原纤维酸性蛋白（GFAP）神经生长因子（NGF）白介素-6（IL-6）
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的:研究星形胶质细胞活化后神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)两种不同作用因子表达的时间规律性，探讨星形胶质细胞活化后启动保护性机制与损伤性机制的时间特性。方法：体外培养星形胶质细胞，将分离纯化的星形胶质细胞分为对照组、活化组、抑制组：将常规用含10%FBS的DMEM（高糖）培养基培养24h后的星形胶质细胞作为对照组细胞，用加入睫状神经营养因子(Ciliary neurotrophic factor,CNTF)（20ng/ml）、10%FBS的DMEM（高糖）培养基培养24h后的星形胶质细胞作为活化组细胞，将加入Genistein（30μmol/L）、10%FBS的DMEM（高糖）培养基作用于活化组细胞再培养24h后的细胞作为抑制组细胞。通过光学显微镜及免疫荧光化学观察各组细胞的形态变化；应用半定量RT-PCR方法分析各组细胞间胶原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA及NGF mRNA、IL-6mRNA表达变化；用ELISA法检测各组星形胶质细胞上清液中不同时间点（6h，24h，48h，72h）NGF、IL-6的含量。结果：活化组与对照组比较，星形胶质细胞胞体变大，数量增多，突起变长增多，呈网状交织；RT-PCR示GFAP mRNA表达增高，NGF mRNA、IL-6mRNA表达亦明显增高，与对照组比较差异有显著性（P＜0.01）；ELISA法检测示星形胶质细胞活化后NGF分泌量在活化后24小时达到高峰，到48小时分泌量下降，24小时内随时间延长逐渐增加，与对照组比较差异有显著性（P＜0.01），时间点48小时与24小时比较差异有显著性（P＜0.01），时间点6小时与24小时比较差异有显著性（P＜0.01）；活化后48小时IL-6的含量达到高峰，到72小时分泌量下降，48小时内随时间延长逐渐增加，与对照组比较差异有显著性（P＜0.01），时间点72小时与48小时比较差异有显著性（P＜0.01），时间点6小时与48小时比较差异有显著性（P＜0.01）；应用抑制剂Genistein干预后，与活化组相比，抑制组细胞胞体变小，数量不再增多，突起缩短减少，星形胶质细胞活化被抑制，GFAP mRNA表达下降，NGFmRNA、IL-6mMRA表达亦下降，与活化组比较差异有显著性（P＜0.01）；ELISA法检测示抑制组随时间的延长，NGF、IL-6的含量逐渐下降，与活化组比较差异有显著性（P＜0.01）。结论:1、星形胶质细胞活化后NGF、IL-6表达均上调，但NGF表达时间早于IL-6表达时间；2、Genistein抑制星形胶质细胞活化，可使NGF、IL-6表达下调。

全文目录

主要英文缩略语索引  4-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
材料和方法  12-20
结果  20-24
讨论  24-27
结论  27-28
参考文献  28-32
综述  32-39
  参考文献  36-39
攻读硕士期间撰写的论文  39-40
致谢  40

活化星形胶质细胞NGF、IL-6表达的时间特性

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