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自然流产患者绒毛组织中PAI-1 4G/5G多态性和uPA基因的表达及其意义

作　者: 瞿小玲
导　师: 杨玲竹
学　校: 郑州大学
专　业: 妇产科学
关键词: 自然流产绒毛 PAI-1 4G/5G多态性 uPA
分类号: R714.21
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的自然流产(spontaneous abortion, SA)是妊娠期间常见的并发症,占妊娠总数的10%-15%,其发病机制不清楚,病因复杂。国内外研究示：自然流产患者具有血栓形成的倾向,作为纤溶系统的uPA和PAI-1表达失衡可导致易凝血栓的发生,影响滋养细胞的浸润功能。生理过程中, uPA可以促进子宫内膜基质降解,从而对绒毛浸润、胚胎着床、胎儿生长起重要作用。PAI-1可以抑制uPA的活性,有调节纤溶酶原诱导的绒毛外滋养细胞侵袭转移、细胞外基质降解和血管生成等功能。PA/PAI平衡调节滋养细胞的浸润功能,影响胎儿的血流灌注情况,一旦这一平衡被打破,直接影响着滋养细胞的浸润能力、滋养层绒毛的血流灌注情况,胎儿因供血不足而发生SA。国内外研究资料示：血浆中PAI-1、uPA基因和蛋白表达异常与SA发生有关,但从SA患者绒毛组织种直接提取PAI-1DNA,并分析其基因多态性,以及PAI-1蛋白和uPA蛋白在SA患者绒毛组织中表达情况尚未搜索到足够相关资料。本实验通过测定PAI-1、uPA在绒毛组织中的基因和蛋白表达情况,为SA的病因提供一定的实验室参考依据。方法选取非意愿妊娠而终止妊娠的正常早孕妇女30例为对照组,同期诊断为稽留流产的患者30例为实验组(两组均是在郑州大学第一附属医院妇产科门诊就诊的病人)。在无菌条件下用生理盐水小心冲洗绒毛组织,干净后一部分用10%的甲醛液固定,过夜后石蜡包埋,蜡块于-4℃冰箱中保存。另一部分置于一次性EP管中,5分钟内放入-80℃冰箱中保存；包埋蜡块应用免疫组织化学PV法检测绒毛组织中uPA和PAI-1蛋白表达情况。放入-80℃冰箱中部分应用等位基因特异性-PCR(AS-PCR)法检测PAI-14G/5G多态性的表达情况,RT-PCR法检测uPA mRNA表达情况。结果1.在妊娠绒毛组织中PAI-1蛋白在主要分布在滋养细胞的细胞质中,PAI-1在自然流产组中高表达率(23/30,90.00%)明显高于正常早孕组(5/30,16.67%),差异有统计学意义(X2=32.411,P<0.05)。2.uPA蛋白在妊娠绒毛组织中主要在滋养细胞的细胞质中表达, uPA在自然流产组中高表达率(5/30,16.67%)低于正常早孕组(26/30,86.67%),差异有统计学意义(X2=29.433,P<0.05)。3.PAI-14G/5G基因多态性AS-PCR结果以5G/5G为参照,4G/4G基因型在自然流产组高于正常早孕组,差异有统计学意义(x2=3.901P<0.05)；风险度OR值4.000,95%CI(0.981-16.311).4G等位基因在自然流产组高于5G等位基因,差异有统计学意义(X2=4.848P<0.05),风险度OR值2.27,95%CI(1.088-4.733)。4.uPA mRNA的RT-PCR结果uPA在自然流产组与正常早孕组的平均灰度值分别为：0.223±0.018,0.505±0.059,自然流产组低于正常早孕组,差异有统计学意义(t’=14.349P<0.05)。5.相关联性分析采用Pearson相关分析,相关系数r=-0.639,表明在自然流产患者绒毛组织中的uPA蛋白和PAI-1蛋白表达呈负相关。结论1.uPA在绒毛组织中低表达,PAI-1在绒毛组织中高表达与自然流产发生有关,其中PAI-14G/5G多态性与自然流产的发生有关。2.uPA和PAI-1在绒毛组织中表达失衡与自然流产有关。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略词表  10-11
引言  11-13
材料与方法  13-22
结果  22-25
讨论  25-30
结论  30-31
附图  31-32
参考文献  32-34
综述  34-50
  参考文献  46-50
个人简历  50-51
在校期间发表的学术论文与研究成果  51-52
致谢  52

自然流产患者绒毛组织中PAI-1 4G/5G多态性和uPA基因的表达及其意义

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