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BMSCs移植联合电针刺激对ICH大鼠脑组织GAP-43和Syp表达的影响

作　者: 先德海
导　师: 余崇林
学　校: 泸州医学院
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 骨髓间充质干细胞 生长相关蛋白-43 突触素 脑出血 电针刺激
分类号: R651.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：研究电针刺激联合BMSCs移植对脑出血（ICH）大鼠尾壳核及其附近出血区GAP-43和Syp表达的的影响。方法：将GFP标记的BMSCs常规复苏、传代，经诱导培养6小时后收集细胞，调整细胞浓度至2.5×107个/ml备用。采用胶原酶加肝素诱导法在SD大鼠脑尾壳核附近注射胶原酶和肝素以构建ICH模型。分别于模型构建后2小时、24小时和48小时进行神经损害程度评分（NSS评分），选大于9分者行下一步实验。在模型构建后3天分别注入生理盐水20μl、BMSCs20μl和BMSCs20μl2小时后辅以电针刺激大鼠百会穴和大椎穴，建立实验对照组（NS组）、BMSCs移植组（BMSCs组）和BMSCs移植联合电针组（Ea-BMSCs组），各组又以治疗时间的不同分为移植后1天、3天、5天、7天和14天5个亚组，于上述时间点对大鼠NSS评分后处死大鼠取材备用。分别采用Western blot和RT-PCR法检测尾壳核区GAP-43和Syp蛋白及mRNA在不同组别各个时间点的表达变化。结果：（1）NSS评分。移植前评分：在大鼠ICH建模后移植前，同一时间点不同组别即Ea-BMSCs组、BMSCs组和NS组三组间NSS评分基本一致，无显著性差异(P>0.05）。移植后评分：Ea-BMSCs组在3天、5天、7天、14天与NS组比较NSS评分显著下降(P<0.05）；BMSCs组5天与NS组比较NSS评分明显下降(P<0.05）；Ea-BMSCs组在5、7和14天与BMSCs组比较NSS评分下降(P<0.05）。（2）Western blot定量检测GAP-43和Syp蛋白表达。三组在移植后1天GAP-43少量表达，而Syp在1天未见明显表达，3天后才可见少量表达。三组各时间点组内比较：Ea-BMSCs组GAP-43在3天、5天、7天、14天表达逐渐增强，Syp于5天、7天、14天表达增强，两种标记表达在7-14天最强(P<0.05）；BMSCs组GAP-43在3天、5天和7天表达逐渐增强，7天出现高峰(P<0.05），以后减弱，Syp于5天、7天、14天表达增强，在7-14天较强；NS组GAP-43在3天、5天和7天表达逐渐增强，7天较强，随后减弱，而Syp于5天和7天可见表达，14天未见明显表达。三组组间比较：于5天、7天和14天Ea-BMSCs组与NS组比较GAP-43和Syp表达显著增强(P<0.05），Ea-BMSCs组在7天和14天与BMSCs组比较GAP-43表达显著增强(P<0.05），而Syp表达在14天较BMSCs组增强(P<0.05）。（3）RT-PCR半定量检测GAP-43和Syp mRNA水平。三组在移植后1天GAP-43mRNA水平即可升高，而Syp mRNA水平较低，3天后Syp mRNA水平升高。三组各时间点组内比较：Ea-BMSCs组GAP-43于3天、5天、7天、14天mRNA水平逐渐升高，Syp于5天、7天、14天mRNA水平较高，两种mRNA水平在7-14天最高(P<0.05）；BMSCs组GAP-43mRNA水平在3天、5天和7天升高，尤以7天为甚（P<0.05），随后开始下降，Syp mRNA于5天、7天、14天表达较高，于7-14天更高；NS组GAP-43mRNA水平在3天、5天和7天表达逐渐升高，7天较高，然后下降， Syp于5天和7天可见mRNA表达，14天无显著表达。三组组间比较：在5天、7天和14天Ea-BMSCs组与NS组比较GAP-43和Syp mRNA表达水平显著升高（P<0.05），Ea-BMSCs组在5天、7天和14天与BMSCs组比较GAP-43mRNA表达明显升高（P<0.05），Syp mRNA在14天较BMSCs组升高（P<0.05）。结论：（1） BMSCs移植联合电针刺激治疗实验性ICH大鼠较单纯BMSCs移植更能提高出血灶及其周边区GAP-43的表达，促进轴突生长；（2）BMSCs移植联合电针刺激治疗实验性ICH大鼠较单纯BMSCs移植能明显增强Syp的表达，加速突触再生；（3）电针刺激联合BMSCs移植治疗大鼠ICH的作用机制可能是通过上调GAP-43和Syp表达，促进轴突生长和加速突触再生，以建立更多突触联系和神经环路，改善神经再生微环境，促进BMSCs增殖分化为神经元和胶质细胞，使受损神经功能恢复，进而增强BMSCs移植治疗脑出血神经功能损伤修复效果。

全文目录


摘要  4-7
Abstract  7-11
前言  11-14
材料与方法  14-28
  1 实验材料与仪器  14-17
  2 实验方法  17-28
结果  28-36
  1.大鼠神经功能缺损评价  28-29
  2. Western Blot 定量检测脑组织 GAP-43 和 Syp 蛋白表达  29-32
  3. RT-PCR 半定量检测 GAP-43 和 Syp mRNA 表达水平  32-36
讨论  36-45
  1 ICH 研究现状  36
  2. ICH 动物模型的构建  36-38
  3. BMSCs 移植和电针刺激联合 BMSCs 移植治疗 ICH  38-42
  4 电针刺激联合BMSCs移植治疗ICH对GAP-4 3和Syp表达影响  42-45
结论  45-46
参考文献  46-50
英汉缩略词对照表  50-51
致谢  51-52
综述  52-63
  参考文献  58-63

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