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LPS诱导血小板减少症与DIC关系的研究

作　者: 宗丹丹
导　师: 曹书华
学　校: 天津医科大学
专　业: 急诊医学
关键词: 血小板减少症脂多糖弥漫性血管内凝血促血小板生成素凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物 D-二聚体纤维蛋白(原)降解产物平均血小板体积
分类号: R558.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：通过腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠血小板减少症模型,观察不同剂量LPS对小鼠血小板数量的影响；通过检测MPV、血浆TPO水平判断LPS诱导的血小板减少症和血小板生成的关系；通过监测血浆TAT、D-二聚体、FDPs水平分析凝血系统在血小板减少症中的作用；通过组织病理学检查判断LPS引起的血小板减少时各脏器的病理改变,并探讨其与弥漫性血管内凝血(DIC)的关系。方法：本实验分为两部分。第一部分：建立血小板减少症模型。采用SPF级C57BL/6雄性小鼠,75只,8-10周龄,体重18-22g,随机分为生理盐水对照组(C组)、低剂量LPS组(L组)、中等剂量LPS组(M组)、高剂量LPS组(H组)和极高剂量LPS组(S组)。C、L、H、M、S组各15只,分别给予腹腔注射生理盐水5ml/kg、LPS0.05、0.5、5、50mg/kg o观察并记录小鼠反应、死亡时间,并按照时点经内眦取血,检测小鼠血常规,记录血小板数量。第二部分：观察不同剂量LPS对血小板生成和凝血系统的影响。采用SPF级C57BL/6雄性小鼠,8-10周龄,体重18～22g,随机分为生理盐水4h和24h对照组(C1和C2组)、低剂量LPS4h组(LL4组)、高剂量LPS4h组(HL4组)、低剂量LPS24h组(LL24组)、高剂量LPS24h组(HL24组)。其中C1、LL4、HL4组分别给予腹腔注射生理盐水、LPS0.5mg/kg、LPS50mg/kg,4h后经内眦取血并脱颈处死；C2、LL24、HL24组给予腹腔注射生理盐水、LPS0.5mg/kg、LPS50mg/kg,24h后经内眦取血并脱颈处死。检测血常规,采用酶联免疫吸附法测定血浆中TPO、D-二聚体、TAT、FDPs水平；摘取小肠和肺组织进行HE染色,观察组织病理学改变并进行组织损伤病理学评分。结果：C57BL/6小鼠对腹腔注射LPS反应敏感。低剂量LPS (0.05mg/kg)在注射后2h即可诱发小鼠发生血小板减少,且血小板减少的程度随着LPS剂量的增加而加重。当注射极高剂量LPS (50mg/kg)时,小鼠72h死亡率高于70%。L组的血小板计数(PLT)在腹腔注射LPS后8h降至最低,然后逐渐回升,24h后恢复正常；M组、H组的PLT在腹腔注射LPS后24h降至最低,然后逐渐回升,72h后M组恢复正常,而H组仍稍低于正常。S组的血小板数量呈进行性下降并且无回升趋势。注射LPS后4h,LL4组、HL4组的PLT显著低于C1组(P<0.05),HL4组的PLT显著低于LL4组(P<0.05)；LL4组、HL4组的白细胞计数(WBC)显著低于C1组(P<0.05),而HL4组与LL4组相比无统计学差异(P>0.05)；LL4组、HL4组的平均血小板体积(MPV)稍高于C1组,但无统计学意义(P>0.05)；三组的血浆TPO、D-二聚体、FDPs水平无显著性差异(P>0.05)；LL4组、HL4组的血浆TAT水平显著低于C1组(P<0.05),而HL4组与LL4组相比无显著性差异(P>0.05)；HL4组、LL4组的小肠和肺组织损伤评分显著高于C1组(P<0.05),并且HL4组的评分显著高于LL4组(P<0.05)。注射LPS后24h,LL24组、HL24组的PLT、WBC显著低于C2组(P<0.05),并且HL24组的PLT、WBC显著低于LL24组(P<0.05)：LL24组、HL24组的MPV显著高于C2组(P<0.05)；三组的血浆TPO、D-二聚体、FDPs水平无统计学差异(P>0.05)；LL24组、HL24组的血浆TAT水平显著低于C2组(P<0.05),并且HL24组的TAT水平显著低于LL24组(P<0.05)；HL24组、LL24组的小肠和肺组织损伤病理学评分显著高于C2组(P<0.05),并且HL24组的评分显著高于LL24组(P<0.05)。结论：1、在血小板减少症模型中,C57BL/6小鼠对腹腔注射LPS反应敏感,注射低剂量LPS (0.05mg/kg)后2h即可诱发小鼠发生明显的血小板减少,随着剂量的加大,血小板减少的程度逐渐加重,血小板恢复至正常时间延长；当注射极高剂量LPS (50mg/kg)时,PLT进行性下降并且无回升趋势,小鼠72h死亡率高于70%。2、腹腔注射LPS后4h与24h小鼠发生的血小板减少可能是由于血小板在外周破坏增加引起,与血小板生成减少无直接关系。3、腹腔注射LPS后4h与24h发生的血小板减少症可能与DIC无直接关系。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
縮略语/符号说明  10-11
前言  11-14
  研究现状、成果  11-12
  研究目的、方法  12-14
一、小鼠血小板减少症模型的建立  14-21
  1.1 实验材料  14
    1.1.1 仪器设备  14
    1.1.2 主要试剂及配制  14
    1.1.3 实验动物  14
  1.2 实验方法  14-15
    1.2.1 药物制备  14
    1.2.2 动物分组  14-15
  1.3 统计学处理  15
  1.4 结果  15-18
    1.4.1 一般情况观察  15-16
    1.4.2 LPS致小鼠血小板减少模型——不同剂量LPS致PLT的变化  16-18
  1.5 讨论  18-19
  1.6 小结  19-21
二、LPS诱导血小板减少症与血小板生成和DIC的关系  21-37
  2.1 对象和方法  21-22
    2.1.1 仪器设备  21
    2.1.2 主要试剂及配制  21
    2.1.3 实验动物  21-22
  2.2 实验方法  22-25
    2.2.1 药物制备  22
    2.2.2 动物分组  22
    2.2.3 组织标本  22
    2.2.4 组织切片制作步骤  22-23
    2.2.5 组织病理学评分  23-24
    2.2.6 血标本检测  24-25
  2.3 统计学处理  25
  2.4 结果  25-31
    2.4.1 一般情况观察  25
    2.4.2 血小板减少与血小板生成和DIC的关系  25-28
    2.4.3 小鼠脏器的病理学改变  28-31
  2.5 讨论  31-36
    2.5.1 LPS刺激后PLT与WBC的变化  31-32
    2.5.2 LPS对血小板生成的影响  32-33
    2.5.3 LPS致血小板减少与DIC的关系  33-36
  2.6 小结  36-37
结论  37-38
参考文献  38-43
发表论文和参加科研情况说明  43-44
附录  44-47
  2001年国际脓毒症定义会议关于脓毒症诊断的新标准  44-46
  DIC的诊断标准  46-47
综述  47-55
  综述参考文献  52-55
致谢  55

LPS诱导血小板减少症与DIC关系的研究

内容摘要

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