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上海地区梅毒患者梅毒螺旋体基因分型及与神经梅毒相关性的初步研究

作　者: 戴婷
导　师: 王千秋
学　校: 北京协和医学院
专　业: 皮肤病与性病学
关键词: 上海梅毒螺旋体基因型神经梅毒血液DNA提取
分类号: R759.1
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

第—部分：上海地区早期梅毒患者皮损拭子梅毒螺旋体分型及与神经梅毒相关性的初步研究背景：梅毒是一种性传播疾病,可增加HIV感染和传播的危险性,严重影响人类身心健康。20世纪80年代以来我国梅毒发病率迅速上升,上海地区梅毒发病率远超全国平均发病率。小样本分子流行病学研究显示上海地区梅毒螺旋体常见型别为14f,此结果与中国其他地区结果存在差异。目的：对上海地区较大样本梅毒患者的皮损进行梅毒螺旋体基因分型研究、连续5年监测其变化,为梅毒的分子流行病学研究和预防提供可靠的实验室依据。同时初步探讨梅毒螺旋体的基因型别与神经梅毒的相关性。方法：2007年8月至2012年12月就诊于上海市皮肤病医院,有湿润梅毒皮损的患者,取拭子进行DNA提取,tp47基因筛选梅毒螺旋体DNA,PCR扩增arp、tpr及tp0548三种基因,以arp基因片段长度大小、tpr基因RFLP型别及tp0548基因测序结果分型,联合确定梅毒螺旋体基因型别。结果：共入组372例患者,其中梅毒螺旋体DNA阳性者316例,可以完全分型者304例。共检测出10种arp型别,分别为4,6,8,9,11,12,13,14,15及19型；检出3种tpr型别,分别为a d及o型。联合arp及tpr,可区分为12个CDC型别,最常见型别为14d。依据tp0548测序结果,可分为a,c,f,g及i五种型别。联合arp、tpr、tp0548三基因,12种CDC型别可进一步区分为14种基因亚型。最常见亚型为14d/f,占绝大多数(88.8%,270/304),次常见亚型为.1.5d/f有11例(11/304,3.6%),其次为13d/f和19d/c,分别有4例患者感染(4/304,1.3%)。5年时间内,14d/f型一直为上海地区优势基因型。304例可完全分型的患者中,有52例进行了腰椎穿刺。其中44例感染14d/f型的患者中,2例诊断为神经梅毒；2例感染19d/c型的患者,均诊断为神经梅毒；另有6例感染非14d/f非19d/c型的梅毒患者,未发现神经梅毒。结论：上海地区梅毒螺旋体型别分布较为集中,最常见基因型别为14d/f型,持续5年均占绝对主导优势。本研究中未发现感染14d/f型是神经梅毒发病的高危因素。基因型别与神经梅毒的相关性研究,尚需积累更多的数据。第二部分：血液梅毒螺旋体DNA提取取方法的构建背景：目前多采用梅毒患者的湿润皮损拭子进行DNA提取,对梅毒螺旋体进行分子流行病学研究及耐药基因检测等。用梅毒患者其他类型临床样本进行DNA提取及分子分型研究较少,结果不一,国内尚无相关报道。而多数梅毒患者就诊时无湿性溃疡,限制了分子生物学的相关研究。方法：采集未经治疗的一期,二期,隐性梅毒患者全血及血浆。使用Qiagen DNA Blood Mini试剂盒,优化条件进行DNA提取,tp47基因筛选梅毒螺旋体DNA, PCR扩增arp、tpr及tp0548三种基因,联合确定基因型别。结果：共提取60份样本,其中包括15例血浆样本、45例全血样本。45例全血样本中,来自一期梅毒10例,二期梅毒患者25例,隐性梅毒10例。血浆样本所提取DNA经tp47基因筛查均为阴性。全血样本中,一期梅毒阳性率0%(0/10),二期梅毒阳性率36%(9/25),隐性梅毒阳性率20%(2/10)。tp47基因阳性样本中,arp基因阳性率为45.5%(5/11),tpr基因阳性率为54.5%(6/11)。结论：初步构建、优化了从血液中提取梅毒螺旋体DNA的方法。二期梅毒患者的全血标本用于梅毒螺旋体DNA提取及分型,阳性率较高。

全文目录

缩略词表  4-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-15
  参考文献  13-15
第一部分：上海地区早期梅毒患者皮损梅毒螺旋体基因分型及与神经梅毒相关性的初步研究  15-50
  1 引言  15
  2 对象与方法  15-31
  3 实验结果  31-42
  4 讨论  42-46
  5 结论  46-47
  参考文献  47-50
第二部分：血液梅毒螺旋体DNA提取方法的构建及分型结果  50-66
  1 引言  50
  2 对象与方法  50-59
  3 结果  59-61
  4 讨论  61-64
  5 结论  64-65
  参考文献  65-66
全文小结  66-68
论文相关综述  68-76
  参考文献  73-76
论文相关论著  76-105
在读期间已发表文章及待发表文章  105
在读期间参加学术会议和培训  105-106
致谢  106-107

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