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有氧游泳运动对衰老模型大鼠学习记忆和海马内IL-6、IL-10、小胶质细胞的影响

作　者: 曹阳
导　师: 成晓龙; 杨桂姣
学　校: 山西医科大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 大鼠炎性衰老游泳训练 IL-6 IL-10 小胶质细胞
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：观察有氧游泳运动前后大鼠空间记忆能力及运动后大鼠海马内IL-6、IL-10的表达情况和小胶质细胞的活化状态，探讨有氧游泳运动对炎性衰老的调节作用和对衰老引起的空间记忆能力减退的改善作用，为运动预防衰老拓展新的思路。方法：将40只雄性SD大鼠随机分为衰老运动组（n=10）、衰老安静组（n=10）、对照运动组（n=10）、对照安静组（n=10），建立大鼠衰老模型并设立对照，运动组进行有氧游泳运动，安静组放予同等条件的浅水中。通过Morris水迷宫观察各组大鼠空间记忆能力的变化。冰上分离新鲜脑组织或多聚甲醛灌注固定取脑，前者经Westernblot反应，半定量分析研究有氧游泳运动后海马内IL-10的含量变化，后者经冰冻切片、免疫荧光染色，观察IL-6、IL-10蛋白的定位和分布表达规律以及小胶质细胞的活化状态。结果：⑴Morris水迷宫：造模前衰老运动组、衰老安静组、对照运动组、对照安静组四组大鼠逃避潜伏期、到达平台游过距离相互间均无统计学差异（P>0.05）。造模并训练后,衰老安静组的逃避潜伏期时间较长，与对照运动组、对照安静组的差异具有统计学意义（P<0.05）,虽然衰老运动组的逃避潜伏期也较，但与衰老安静组的差异不明显（P>0.05）；衰老安静组到达平台游过距离较长，与衰老运动组、对照运动组及对照安静组相比均有统计学差异（P<0.05）；在逃避潜伏期、到达平台游过距离两组统计数据中，对照运动组、对照安静组两组之间没有明显的差异（P>0.05）。定位航行实验中各组逃避潜伏期和到达平台游过距离的均数均呈随天数增加而减少的趋势。各组空间探索轨迹图中各组大鼠都具有目标象限的趋向性，在目标象限的轨迹较多。⑵免疫荧光：①IL-6：衰老安静组海马CA1区IL-6的阳性神经元数目较多，与衰老运动组、对照运动组、对照安静组相比有统计学差异（P<0.05）。对照运动组中海马CA1区的阳性神经元数目较少，其与衰老运动组、衰老安静组和对照安静组均有统计学差异（P<0.05）。衰老运动组和对照安静组对比，差异无统计学意义。②IL-10：对照运动组海马CA1区内的IL-10阳性神经元数目较多，与衰老安静组、对照运动组、对照安静三组相比较均有统计学差异（P<0.05）；衰老运动组的IL-10阳性神经元多于衰老安静组，差异有统计学意义（P<0.05）；衰老安静组中的IL-10阳性神经元数目少于其他三组，差异有统计学意义（P<0.05）。③小胶质细胞：观察各组小胶质细胞阳性神经元的形态可见，衰老组的小胶质细胞呈现活化状态，即胞体较大，染色深，突起多较粗长，对照组的小胶质细胞活化状态不明显。⑶WesternBlot结果：在大鼠海马CA1区中，衰老运动组IL-10的表达量最高，与其他三组均有统计学差异（P<0.05）；对照运动组与其他各组相比表达量最低，差异具有统计学意义（P<0.05）；此外衰老安静组的表达量与对照运动组、对照安静组相比也有统计学差异（P<0.05），但与对照安静组更为接近。结论：⑴衰老可导致大鼠学习记忆能力减退，有氧游泳运动能改善衰老大鼠的学习记忆能力，而对正常动物的认知能力没有明显作用；⑵促炎因子随着大鼠衰老表达量可能会有所上升；⑶有氧游泳运动对大鼠脑组织起到良性应激，能够促进抗炎因子的表达，在衰老过程中减轻了衰老大鼠的脑内炎症反应；⑷炎性衰老中的炎症反应可使小胶质细胞活化。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-11
材料与方法  11-17
  1. 材料与试剂  11-12
    1.1 实验动物及主要试剂  11
    1.2 主要仪器设备：  11-12
  2．衰老模型制作  12
  3．衰老模型建立过程中运动抗衰老  12
  4．行为学测试  12-13
  5. 免疫荧光染色  13-14
    5.1 灌注固定取材  13
    5.2 免疫荧光染色  13-14
  6．免疫印迹（WesternBlot）  14-16
    6.1 新鲜取材  14
    6.2 提取海马总蛋白  14
    6.3 蛋白含量的测定  14
    6.4 SDS－PAGE电泳  14-15
    6.5 转膜  15
    6.6 免疫反应  15
    6.7 化学发光，显影，定影  15
    6.8 内参蛋白β-Actin免疫印迹  15-16
  7．图像分析和统计学处理  16-17
    7.1 免疫组织化学图像分析  16
    7.2 WesternBlot条带图像分析  16
    7.3 统计学分析处理  16-17
结果  17-26
  1. 实验动物一般情况  17
  2. Morris水迷宫结果  17-20
    2.1 大鼠视力及速度的比较  17
    2.2 大鼠空间学习记忆功能的比较  17-20
  3. IL-6、IL-10、CD11b/c的免疫荧光结果  20-25
    3.1 IL-6的免疫荧光结果  20
    3.2 IL-10的免疫荧光结果  20-23
    3.3 CD11b/c的免疫荧光结果  23-25
  4. IL-10的WesternBlot结果  25-26
讨论  26-29
结论  29-30
参考文献  30-32
综述  32-36
  参考文献  35-36
个人简历  36-37
致谢  37

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