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大鼠不同部位来源脂肪源性干细胞的增殖能力比较及CM-Dil体外标记研究

作　者: 黄昕昕
导　师: 刘晓燕
学　校: 大连医科大学
专　业: 整形外科学
关键词: 脂肪源性干细胞 SD鼠 CM-Dil
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：观察比较SD大鼠不同部位脂肪源性干细胞体外培养的增殖能力；探讨荧光性染料CM-Dil体外标记ADSC的可行性与时效性。方法：无菌条件下依次切取SD大鼠腹股沟区、附睾区脂肪组织，Ⅰ型胶原酶消化获取脂肪源性干细胞，体外行差速贴壁培养传代。观察腹股沟区（A组）与附睾区（B组）单位体积（1ml）脂肪相同方法下提取的干细胞数量、细胞生长繁殖情况及形态变化，绘制各自生长曲线。取汇合至80%的第三代（P3）附睾来源脂肪源性干细胞，分为实验组（a、b、c组）和对照组（d组）。各实验组使用不同浓度的CM-Dil标记液体外标记ADSC，分别为a组（20μg/ml）、b组（30μg/ml）、c组（40μg/ml）。空白对照组（d组）无CM-Dil标记及其他特殊处理，体外行差速贴壁培养并传代。观察并比较两组细胞形态，绘制各实验组与对照组的细胞生长曲线，计算a、b、c三组细胞24小时的标记率，分析此标记方法的可行性。观察期限25天，计算不同时间点a、b、c组细胞的标记率，组组间进行统计学分析，探讨其时效性。结果：①在倒置相差显微镜下观察，A、B两组脂肪源性干细胞均呈短小梭形，随培养时间延长，细胞逐渐变得细长，两者的细胞形态均与成纤维细胞相似；②同样消化方法下获取的A组（腹股沟区）细胞数量为（1.03士0.19）×10~3个，B组(附睾区)细胞数量为（2.08士0.15）×10~3，两者存在显著统计学差异(P<0.05)；③A、B两组ADSC的生长曲线均呈“S”形，B组（附睾区）ADSC的的增殖能力高于A组（腹股沟区）；④不同浓度CM-Dil标记液（a组：20μg/ml、b组：30μg/ml、c组：40μg/ml）24h的标记率分别为：（98.16士0.31）%、（98.93士0.77）%、（98.09士0.50）%，组组间无显著统计学差异（P>0.05）；⑤实验组（20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml）与对照组的细胞生长曲线均呈“S”形，其中20μg/ml和30μg/ml的标记浓度对细胞的增殖能力及活力无明显影响。⑥细胞传至第8代（25d）时，c组（40μg/ml）的阳性标记率仍可达到（74.37士1.68）%，与a组（20μg/ml）标记率（67.59士2.53%）存在显著统计学差异（P<0.05）。结论：1、大鼠附睾区脂肪组织所含ADSC在获取数量、细胞活力、体外增殖能力方面要优于腹股沟区ADSC，可作为种子细胞来源的理想供区。2、采用CM-Dil对ADSC进行体外标记具有可行性，20μg/ml、30μg/ml的标记浓度对细胞的增殖能力及活力无明显影响。3、不同浓度CM-Dil在短期内对ADSC的标记率无明显影响，40μg/ml浓度可维持在3周以上。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-11
第一部分大鼠不同部位来源脂肪源性干细胞的增殖能力比较  11-17
  材料和方法  11-13
  结果  13-15
  讨论  15-17
第二部分 CM-Dil 体外标记附睾来源脂肪源性干细胞的研究  17-23
  材料和方法  17-18
  结果  18-21
  讨论  21-23
结论  23-24
参考文献  24-27
综述  27-36
  参考文献  32-36
附录  36-37
致谢  37-38

大鼠不同部位来源脂肪源性干细胞的增殖能力比较及CM-Dil体外标记研究

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