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活血化瘀通络方对糖尿病肾病大鼠的保护作用及对血管紧张素Ⅱ1型受体的影响实验研究

作　者: 贾蕊
导　师: 陈志强
学　校: 河北医科大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 糖尿病肾病血管紧张素Ⅱ1型受体厄贝沙坦动物模型活血化瘀通络中药
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：本实验通过建立糖尿病（DM）的动物模型，应用活血化瘀通络方对动物模型进行药物干预性治疗，通过观察实验动物的24小时尿蛋白定量、血清肌酐（Scr）、糖化血红蛋白（HbA1c）、肾脏病理学变化、免疫组化法检测肾组织中血管紧张素II1型受体（AT1R）的表达、RT-PCR法检测肾组织AT1R mRNA的基因水平、Western-blot方法检测肾组织中AT1R的蛋白含量，研究活血化瘀通络方对糖尿病肾病的治疗作用及可能机制，为临床应用提供理论依据和实验基础。方法：选用清洁级健康雄性Sprague-Dauley大鼠80只，体重90g～120g。普通饲料适应性饲养一周，测定尿蛋白、尿糖均为阴性者，随机选取15只大鼠作正常组，余65只大鼠为造模组，造模组大鼠禁食不禁水12小时后一次性腹腔注射由0.1M枸橼酸缓冲液（PH4.5）配制成的链脲佐菌素（STZ）55mg／kg，正常组注射等体积的枸橼酸缓冲液，72小时后尾静脉取血测血糖，连续三次随机血糖值以≥16.7mmol／L为DM模型成功，3只大鼠血糖值未达标予以剔除。造模组在DM模型成模后，随机分成5组：模型组、活血方治疗组、化瘀通络方治疗组、活血化瘀通络方治疗组、厄贝沙坦组。其中模型组大鼠14只，余各组各大鼠12只。成模一周后予以给药，给药组按大鼠与人体型系数折算出各组大鼠每日所需灌胃的剂量：丹参1.2g/kg/d，川芎0.96g/kg/d，地龙0.8g/kg/d，全蝎0.48g/kg/d，水蛭0.48g/kg/d，厄贝沙坦0.024g/kg/d；正常组、模型组大鼠每天给予2ml纯净水灌胃，每日一次连续给药共16周。16周末留取各组大鼠24小时尿液，测定24小时尿蛋白定量，大鼠尾静脉取血测血糖及糖化血红蛋白(HbA1c)，大鼠禁食不禁水12小时，称量大鼠体重，10%水合氯醛麻醉动物，腹主动脉取血，摘取右肾剥离被膜后称重，留取肾脏皮质标本，观察肾组织超微结构变化及AT1R的表达。结果：1实验大鼠的一般情况正常组大鼠饮食正常，尿量正常，肌肉丰满，毛色光泽，反应灵敏。其余各组大鼠在注射STZ后逐渐出现多饮，多食、多尿症状，实验最后一周，与正常组相比，造模组及各给药组大鼠反应迟钝，精神萎靡，体型偏小，模型组大鼠的症状比各给药组大鼠的症状严重。给药期间造模组及各给药组均有大鼠死亡情况：模型组死亡6只，活血化瘀通络方治疗组死亡1只，厄贝沙坦组死亡2只，死亡原因可能是由于糖代谢障碍所致血糖过高最终导致多脏器衰竭。2各组大鼠体重、右肾重、肥大指数（右肾重/体重）的比较与正常组相比，模型组和各治疗组的体重明显减轻（P<0.05），模型组与各治疗组及各治疗组之间体重无明显的差异（P>0.05）；右肾重各组之间无显著性差异（P>0.05）；与正常组相比，模型组和各治疗组的肥大指数明显偏高（P<0.05），模型组与各治疗组及各治疗组之间无显著性差异（P>0.05）。3各组大鼠24小时尿蛋白定量的比较（24h UTP）与正常组相比，模型组和各治疗组24小时尿蛋白定量明显升高（P<0.05）；与模型组相比，各给药组24小时尿蛋白定量明显降低（P<0.05）；各给药组之间比较，活血方治疗组24小时尿蛋白定量高于其他治疗组（P<0.05）；化瘀通络方治疗组、活血化瘀通络方治疗组、厄贝沙坦组之间无统计学意义（P>0.05）。4各组大鼠糖化血红蛋白（HbA1c）的比较与正常组相比，模型组和各治疗组的糖化血红蛋白明显升高（P<0.05）；模型组与各治疗组及各治疗组之间的糖化血红蛋白无显著性的差异（P>0.05）。5各组大鼠血清肌酐（SCr）的比较各组大鼠血清肌酐水平无显著性差异（P>0.05）。6肾脏病理学改变6.1光镜观察正常组大鼠肾脏肾小球结构清晰完整，未见明显肥大，未见基底膜增厚，未见系膜增生；模型组大鼠肾脏肾小球明显肥大，肾小囊腔呈裂隙状，基底膜明显增厚，系膜细胞和系膜基质弥漫增生、系膜区增宽；与模型组比较，各治疗组大鼠肾小球均轻度肥大，肾小球基底膜均轻度增厚，均可见系膜细胞和系膜基质轻度增生，活血方治疗组表现略重于其他治疗组。6.2电镜观察正常组大鼠肾小球基底膜结构完整，足细胞足突分布均匀，未见融合；模型组大鼠肾小球基底膜显著性均质样增厚，足细胞足突广泛融合；与模型组相比，各治疗组大鼠也有类似的病理改变，但程度较轻，活血方治疗组表现略重于其他治疗组。7免疫组化观测肾组织AT1R的表达正常组AT1R在大鼠肾脏的表达主要位于肾小管内，以近端肾小管为主，远端肾小管、肾小球、肾血管周围也可见少量表达。与正常组相比，模型组及各治疗组的表达明显增加（P<0.05）；与模型组相比，各治疗组的表达明显降低（P<0.05）；活血方治疗组的表达强于其他治疗组（P<0.05）；化瘀通络方治疗组、活血化瘀通络方治疗组、厄贝沙坦组之间无统计学意义（P>0.05）。8Western-blot方法检测肾组织AT1R蛋白的表达与正常组相比，模型组和各治疗组蛋白表达量均增加（P<0.05）；与模型组相比，各治疗组蛋白表达量均减少（P<0.05）；活血方治疗组的蛋白表达量多于其他治疗组（P<0.05）；化瘀通络方治疗组、活血化瘀通络方治疗组、厄贝沙坦组之间无统计学意义（P>0.05）。9RT-PCR方法检测肾组织AT1R mRNA表达水平与正常组相比，模型组和各治疗组AT1R mRNA表达均增高（P<0.05）；与模型组相比，各治疗组AT1R mRNA表达均降低（P<0.05）；活血方治疗组AT1R mRNA表达高于其他治疗组（P<0.05）；化瘀通络方治疗组、活血化瘀通络方治疗组、厄贝沙坦组之间无统计学意义（P>0.05）。结论：1活血化瘀通络方具有对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用。2活血化瘀通络方可以抑制AT1R的表达，与厄贝沙坦作用相似，提示活血化瘀通络中药对DN的治疗作用可能与阻断肾脏局部RAS系统途径有关。

活血化瘀通络方对糖尿病肾病大鼠的保护作用及对血管紧张素Ⅱ1型受体的影响实验研究

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