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蝙蝠葛苏林碱对小鼠心室肌Ca_v1.2钙通道抑制作用的研究

作　者: 丁杰
导　师: 郭莲军
学　校: 华中科技大学
专　业: 药理学
关键词: 蝙蝠葛苏林碱 HEK293细胞 L型钙通道 T型钙通道 钙通道特异性阻断剂 伊拉地平 米贝拉地尔 成年小鼠心室肌细胞 胚胎小鼠心室肌细胞
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：蝙蝠葛苏林碱(daurisoline.DS)是从中药蝙蝠葛(Menisperum dauricum, DC)根茎中提取的双苄基异喹啉类生物碱。本文在离子通道水平观察DS对转染的人胚肾细胞(HEK293)上表达的L型(Cav1.2)和T型(Cav3.1)钙通道的作用及DS对小鼠心室肌细胞发育过程中L型钙通道Cav1.2的影响。方法：1.用膜片钳技术记录在转染的HEK293上表达的L型及T钙通道电流(ICav1.2, and ICav3.1),研究DS对L型及T型钙通道电生理特性的影响。2.采用酶消化法分离成年及胚胎小鼠心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录单个心室肌细胞L型钙通道电流,研究DS对小鼠心室肌细胞发育过程中L型钙通道的影响。结果：1.DS在1～10μmol·L-1浓度范围内呈浓度依赖性的抑制HEK293细胞表达的ICav1.,DS3μmol·L-1对ICav1.2的抑制率为32.37±6.63%,与对照组比,有显著性差异(p<0.001,n=6)；与L型钙通道特异性阻断剂伊拉地平(isradipine,ISR)(3μmol·L-1)组(抑制率为83.38±2.27%)比,有显著性差异(p<0.001,n=6)。2.在不同钳制电位下(-110mV和-70mV),DS在1～10μmol·L-1浓度范围内呈浓度依赖性,非电压依赖性的抑制HEK293细胞表达的ICav3.1。在钳制电位为-110mV和-70mV时,DS3μmol·L-1对ICav3.1抑制率分别为37.92±5.76%和45.29±8.72%,不同钳制电位下,其抑制率并无明显差别(p>0.05,n=6)。T型钙通道特异性阻断剂米贝拉地尔(mibefadil,MIB)(3μmol·L-1),对HEK293细胞表达的ICav3.,的抑制率在钳制电位为-110mV和-70mV时分别为50.52±7.23%和94.80±1.62%,不同钳制电位下,其抑制率有显著性差异(p<0.001,n=6)。在钳制电位为-110mV下,DS(3μmol·L-1)对HEK293细胞表达的ICav3.1抑制作用与相同浓度的米贝拉地尔(3μmol·L-1)比,无显著性差异(p>0.05,n=6)；当钳制电位为-70mV时,DS(3μmol·L-1)对HEK293细胞表达的ICav3.,抑制作用与相同浓度的米贝拉地尔(3μmol·L-1)比,作用较弱(p<0.001,n=6)。3.在相同钳制电位下(-110mV或-70mV),给药前后,DS对HEK293细胞表达的T型钙通道Cav3.1的失活常数τinact值无显著差异(p>0.05,n=6)。4.DS在1～10μmol·L-1浓度范围内呈浓度依赖性的抑制成年小鼠心室肌细胞ICav1.2。DS3μmol·L-1对ICav1.2的抑制率为50.17±4.51%,与对照组比有显著性差异(p<0.001,n=6)；与L型钙通道的阻滞剂伊拉地平3μmol·L-1组(抑制率为81.75±2.02%)比,具有显著性差异(p<0.001,n=6).DS3μmol·L-1使得成年小鼠心室肌L型钙通道Cav1.2失活曲线左移,失活后恢复曲线右移。5.DS3μmol·L-1能明显抑制胚胎小鼠心室肌细胞ICav1.2,其抑制率为52.38±2.44%,与对照组比(p<0.001,n=5),有显著性差异；与L型钙通道特异性阻断剂伊拉地平3μmOl·L-1组(抑制率为73.94±3.24%)比,(p<0.001,n=5),具有显著性差异。结论：1.DS浓度依赖性的抑制HEK293细胞表达的IC1.2及ICav3.1,其作用强度与相同浓度的特异性钙通道阻断剂比较弱,p<0.001。2.Cav3.1通道特异性阻断剂MIB对T型钙通道电流的抑制作用强弱受钳制电位的影响,钳制电位越靠近去极化方向,MIB的作用效果越强,反之越弱。而DS对ICa v3.1的抑制作用与钳制电位无关。3.在同一钳制电位下(-110mV或-70mV),给予DS后,与对照组比,DS不影响HEK293细胞表达的T型钙通道Cac3.1的失活过程,p>0.05。4.DS浓度依赖性的抑制成年小鼠心室肌细胞ICav1.2,其作用强度与相同浓度的特异性钙通道阻断剂ISR比较弱,p<0.001。DS能加快成年小鼠心室肌细胞L型钙离子通道Cav1.2失活速度,且延长Cav1.2失活后的恢复时间。5.DS能抑制胚胎小鼠(15.5-18.5天)心室肌细胞ICav1.2,其作用强度与相同浓度的特异性钙通道阻断剂ISR比较弱,p<0.001。结合上述DS对成年小鼠心室肌细胞ICav1.2的试验,表明DS对小鼠心室肌细胞发育过程L型钙离子通道Cav1.2电流都有抑制作用。

全文目录


縮略词  5-6
中文摘要  6-9
Abstract  9-12
前言  12-16
  参考文献  14-16
第一部分 蝙蝠葛苏林碱对转染HEK293细胞L型及T型钙通道的作用  16-38
  1. 材料与方法  16-22
  2. 实验结果  22-33
  3. 讨论  33-35
  参考文献  35-38
第二部分 蝙蝠葛苏林碱对成年小鼠心室肌细胞L型CAV1.2钙通道的作用  38-49
  1. 材料与方法  38-40
  2. 实验结果  40-46
  3. 讨论  46-47
  参考文献  47-49
第三部分 蝙蝠葛苏林碱对胚胎小鼠心室肌细胞L型CAV1.2钙通道的作用  49-56
  1. 材料与方法  49-51
  2. 实验结果  51-53
  3. 讨论  53-54
  参考文献  54-56
研究工作总结及创新点  56-57
综述 北豆根生物碱类成分与钙通道关系的研究进展  57-76
  参考文献  69-76
博士研究生期间发表的文章  76-79
致谢  79-80

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