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一点红多糖和生物碱的提取分离及生物活性研究

作　者: 倪小智
导　师: 孙卫东; 王立升
学　校: 广西大学
专　业: 轻工技术与工程
关键词: 一点红多糖生物碱克氏千里光碱抑菌抗肿瘤
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

一点红,为菊科,别名红叶草、红花草、石青红、七十二枝花等,是我国南方地区经常使用的传统中草药。全球约有100种,主要分布于亚洲和非洲热带,少数产于美洲。在我国大多数产于福建、贵州、江西、云南、广西、广东等地区,其主要生长于山坡、田间及路旁。在我国其可作为药食两用山野蔬菜被人们所熟知,性味：苦,凉。功能主治：湿热腹泻、感冒发烧、咽喉肿痛、口腔溃疡、肺炎、乳腺炎、肠炎、急性扁桃体炎、胆囊炎、小儿上呼吸道感染及支气管肺炎等多种疾病,同时它也是花红片、醒脾养儿冲剂的主要原料药材。本论文对一点红多糖及生物碱的提取工艺进行了优化。并对一点红多糖进行抑菌活性研究,测出其最小抑菌浓度。同时将一点红总生物碱按照pH由小到大以及极性由小到大的顺序分段,对各段进行抗肿瘤活性研究。研究内容主要有以下几个方面：1.一点红多糖提取工艺研究本论文采用了常用的水提法对一点红多糖进行提取。对单因素温度、料液比、提取次数、提取时间进行了研究,得到最优单因素条件：温度80℃,料液比1：30,提取次数2次,提取时间2h；并进行了4个因素3个水平的正交实验考察,以提取率作为考察指标,得到最优工艺条件：温度70℃,料液比1：30,提取次数2次,提取时间2h。验证最佳工艺,其粗多糖提取物中多糖的提取率为3.38%。2.克氏千里光碱的分离利用乙醇提取和酸碱处理得到的总生物碱初品,经二氯甲烷萃取后,使用硅胶柱进行洗脱,利用薄层色谱法(TLC)跟踪检测各梯度洗脱部位,选取乙酸乙酯-甲醇(2：1)洗脱部位用半制备高效液相色谱仪做进一步分离,利用波谱分析的方法鉴定分离出的单体化合物的结构,确定该物质为克氏千里光碱。3.一点红总生物碱提取工艺研究以分离得到的单体克氏千里光碱为对照品,采用分析高效液相色谱仪做标准曲线。对乙醇提取一点红总生物碱的工艺进行了优化,考察了乙醇体积分数、提取温度、提取时间和提取次数四个因素进行了研究,得到最优单因素条件：乙醇体积分数为85%,提取温度为85℃,提取时间为3h,提取次数为2次；并进行了4个因素3个水平的正交实验考察,得到最优工艺条件：乙醇体积分数为85%,提取温度为85℃,提取时间为2h,提取次数为3次。验证最佳工艺,其总生物碱提取率为0.87mg/g。4.多糖抑菌活性研究按照确定的最佳工艺条件,对提取出的多糖进行抑菌活性研究,并测定其最小抑菌浓度。结果表明,一点红多糖对枯草芽孢杆菌有抑菌活性,其MIC为25mg／mL。5.生物碱抗肿瘤活性研究利用乙醇提取出和稀盐酸处理得到的一点红总生物碱初品,按照pH由小到大以及极性由小到大的顺序分段,得到11个不同部位,并对这些部位进行体外抗肿瘤活性研究。结果发现,在高浓度时,除pH为8部位外,其余各部位均对细胞株HepG2有较好的增殖抑制活性；在低浓度时,只有pH为7的部位对细胞株HepG2有增殖抑制活性；pH为5、pH为7和pH为9三个部位在高浓度时对细胞株Hep3B和耐药细胞株R-HepG2均有增殖抑制活性。

全文目录

摘要  4-7
ABSTRACT  7-14
第一章绪论  14-25
  1.1 一点红概述  14-16
    1.1.1 一点红化学成分的研究进展  14-15
    1.1.2 一点红的药理作用  15-16
  1.2 多糖概述  16-20
    1.2.1 多糖提取方法  16-18
    1.2.2 多糖分离纯化方法  18
    1.2.3 多糖的功能作用  18-20
  1.3 生物碱类化合物概述  20-24
    1.3.1 生物碱类化合物的提取方法  20-21
    1.3.2 生物碱类化合物的分离方法  21-22
    1.3.3 生物碱类化合物的功能作用  22-24
  1.4 本文的研究目的与意义  24-25
第二章一点红多糖提取工艺的研究  25-32
  2.1 实验部分  25-27
    2.1.1 实验材料与仪器  25
    2.1.2 一点红多糖提取工艺路线  25-26
    2.1.3 苯酚溶液的配制  26
    2.1.4 苯酚-硫酸显色法测定多糖含量标准工作曲线的绘制  26-27
    2.1.5 一点红多糖提取率计算方法  27
  2.2 结果与讨论  27-31
    2.2.1 提取温度对提取率的影响  27
    2.2.2 料液比对提取率的影响  27-28
    2.2.3 提取次数对提取率的影响  28-29
    2.2.4 提取时间对提取率的影响  29
    2.2.5 正交试验结果  29-30
    2.2.6 验证实验结果  30-31
  2.3 本章小结  31-32
第三章克氏千里光碱的分离及结构确定  32-39
  3.1 实验材料和方法  32-33
    3.1.1 试剂与仪器  32
    3.1.2 实验方法  32-33
  3.2 实验结果与分析  33-37
    3.2.1 TLC检测硅胶柱分离结果  33-34
    3.2.2 样品Ⅰ分离分析结果  34
    3.2.3 单体结构的确定  34-37
  3.3 本章小结  37-39
第四章一点红总生物碱提取工艺的优化  39-48
  4.1 实验部分  39-42
    4.1.1 实验材料与仪器  39
    4.1.2 供试品溶液的配制  39
    4.1.3 标准曲线的绘制  39-40
    4.1.4 精密度试验  40
    4.1.5 稳定性试验  40-41
    4.1.6 重复性试验  41
    4.1.7 加样回收试验  41-42
  4.2 结果与讨论  42-47
    4.2.1 不同体积分数的乙醇水溶液对提取率的影响  42-43
    4.2.2 提取温度对提取率的影响  43
    4.2.3 提取时间对提取率的影响  43-44
    4.2.4 提取次数对提取率的影响  44-45
    4.2.5 正交试验结果  45-46
    4.2.6 验证试验结果  46-47
  4.3 本章小结  47-48
第五章一点红多糖体外抑菌活性研究  48-51
  5.1 实验材料  48
    5.1.1 材料与仪器  48
    5.1.2 一点红多糖样品  48
  5.2 多糖的抑菌活性研究  48-49
    5.2.1 菌液制备  48
    5.2.2 含多糖纸片制备  48-49
    5.2.3 多糖抑菌活性的测定  49
    5.2.4 多糖最小抑菌浓度的测定  49
  5.3 实验结果与分析  49-50
  5.4 本章小结  50-51
第六章一点红生物碱体外抗肿瘤活性研究  51-55
  6.1 实验部分  51-52
    6.1.1 材料与仪器  51
    6.1.2 样品的制备  51-52
    6.1.3 各段样品的抗肿瘤活性研究  52
  6.2 实验结果与分析  52-53
  6.3 本章小结  53-55
第七章结论与展望  55-57
  7.1 结论  55
  7.2 展望  55-57
参考文献  57-62
致谢  62-63
攻读学位期间发表论文情况  63

一点红多糖和生物碱的提取分离及生物活性研究

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