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白蔹抗肿瘤活性部位化学成分及其含量测定研究

作　者: 杭佳
导　师: 陈树和
学　校: 湖北中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 白蔹 抗肿瘤 化学成分 含量测定
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


恶性肿瘤是目前危害人类健康和生命的最严重疾病之一。目前临床用于治疗肿瘤的药物多为化学合成药，其毒副作用强和产生耐药性等问题严重影响临床疗效。因此，从中药、天然药物中发掘高效、低毒的新抗肿瘤药物，成为药物研究工作者关注的热点。中药白蔹为葡萄科蛇葡萄属植物白蔹（Ampelopsis japonic（Thumb.）Makino）的干燥块根，其味苦、辛，微寒，具有清热解毒、消痈散结、敛疮生肌等功效，用于疔疮，痈疽发背，瘰疬，烧烫伤等疾病的治疗。现代药理研究表明该药具有抗菌、免疫调节及抗肿瘤等作用，本实验室前期研究已经证实白蔹有较好的抗肿瘤作用。历代本草记载白蔹无毒，本实验室对白蔹不同组分的小鼠急性毒性实验结果亦显示其安全性高。因此，白蔹是一种值得关注的潜在低毒抗肿瘤中药。本研究采用生物活性指导下的有效成分分离方法，研究了白蔹抗肿瘤活性部位的化学成分，并对药材进行了质量标准提高研究，为抗肿瘤中药新药开发及完善白蔹药材质量标准提供了科学依据。本文主要完成了以下工作：1、采用MTT法，选择前期研究筛选出的敏感细胞株人肝癌细胞株HepG2细胞，对白蔹醇提物的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水溶液部位进行体外抗肿瘤活性筛选。实验结果表明，白蔹乙醇提取物萃取部位中抑制肿瘤活性最强的为乙酸乙酯部位，石油醚及正丁醇部位也同样具有一定的抗肿瘤作用。2、采用硅胶柱层析，依次用四种不同极性的溶剂（石油醚、乙醚、乙酸乙酯、甲醇）作为洗脱剂对抗肿瘤活性部位进行粗分离，得到四个极性不同组分。活性筛选结果显示，乙醚和乙酸乙酯部分的抗肿瘤活性较其它两个部分更好，其中，乙醚部分抗肿瘤活性最佳。3、利用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶（LH-20型）柱色谱、制备型HPLC等色谱分离技术，以抗肿瘤活性筛选试验结果为依据，从乙醚和乙酸乙酯洗脱组分物质中共分离出9种单体成分（化合物1-9）。通过1H-NMR、13C-NMR、H-HCOSY、C-H HMBC、MS等现代波谱方法分析其结构，鉴定了其中的6个化合物，分别为：β-谷甾醇（化合物1，β-sitosterol）、齐墩果酸（化合物2，oleanolic acid）、没食子酸（化合物3，gallic acid）、白藜芦醇（化合物4，resveratrol）、儿茶素（化合物5，Cianidanol）、表儿茶素（化合物6，epicatechin）。4、采用MTT法，对分离得到的儿茶素（化合物5）、表儿茶素（化合物6）、化合物7进行抗肿瘤活性筛选。结果显示化合物7具有较好的抗肿瘤活性，在24、48、72h小时的IC50分别为46.98mg·L-1、57.79mg·L-1、24.87mg·L-1。结合前期的研究结果，白蔹抗肿瘤的活性成分主要有没食子酸、白藜芦醇、齐墩果酸及化合物7。5、建立了高效液相色谱波长切换法同时测定白蔹中没食子酸、原儿茶醛、儿茶素、白藜芦醇4种成分含量的方法。方法简便快速、灵敏度高、重现性好，可用于白蔹的质量控制，为完善其质量标准提供了科学依据。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
前言  10-11
第一章 白蔹有效物质部位抗肿瘤活性筛选研究  11-18
  1 提取分离  11-12
  2 白蔹抗肿瘤有效物质部位的筛选  12-17
  3 本章小结  17-18
第二章 白蔹有效物质部位的化学成分研究  18-28
  1 仪器与试药  18-19
  2 白蔹活性成分的分离  19-21
  3 结构鉴定  21-26
  4 讨论  26-27
  5 本章小结  27-28
第三章 单体化合物的抗肿瘤活性筛选  28-32
  1 仪器和试药  28-29
  2 单体化合物的抗肿瘤活性研究  29-31
  3 讨论  31
  4 本章小结  31-32
第四章 白蔹药材主要成分的含量测定研究  32-42
  1 仪器与试药  32
  2 方法与结果  32-40
  3 讨论  40
  4 本章小结  40-42
第五章 结语与创新  42-44
  1 主要研究结果  42
  2 本文的创新之处  42-43
  3 展望  43-44
第六章 综述  44-61
  1 白蔹的研究概况  44-51
  2 中药抗肿瘤有效成分研究  51-56
  3 中医药抗肿瘤研究进展及思考  56-60
  4 本文研究目的与研究思路  60-61
参考文献  61-64
已发表文章  64-65
致谢  65-66
附图  66-78

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学 > 有效成分的分离与提取
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