学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

养殖鳗鲡致病性气单胞菌的分离与鉴定

作　者: 杨求华
导　师: 关瑞章; 郭松林
学　校: 集美大学
专　业: 水产养殖
关键词: 养殖鳗鲡致病菌气单胞菌分类鉴定基因序列分析药敏试验
分类号: S943
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 137次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本文主要研究养殖患病鳗鲡的致病性气单胞菌。从患病鳗鲡的病灶分离得到试验菌株，选择生理生化指标具有明显差异的气单胞菌进行攻毒感染试验。以致病性的气单胞菌为研究对象，利用Biolog自动微生物鉴定系统和基因序列分析方法对这些菌株进行准确的菌种分类和鉴定，同时分析这些菌株对抗生素药物的敏感性。主要结果如下：1．对9批养殖患病鳗鲡细菌性疾病的病原进行了研究，从患病鳗鲡肝脏和肾脏等部位共分离得到56株菌，经生化试剂盒鉴定筛选了其中5株气单胞菌菌用于攻毒感染试验，结果表明有3株可明显引起注射鳗鲡发病和死亡，这些致病菌被初步鉴定为兽生气单胞菌、波波夫气单胞菌和异嗜糖气单胞菌。2．以5株新分离的致病性气单胞菌和27株试验室保存的未鉴定至种的致病性气单胞菌为材料，采用Biolog自动微生物鉴定系统对这些菌株进行鉴定。实验结果显示：32株气单胞菌分为5个种，包括有21株嗜水气单胞菌，7株维氏气单胞菌，1株豚鼠气单胞菌，2株简达气单胞菌和1株兽生气单胞菌。其中25株的鉴定值可信度较高，可能性大于80%，另外7株的鉴定可能性值较低，包括有2株嗜水气单胞菌B50和B65(可能性分别为0.582和0.732)，3株维氏气单胞菌B41、B67和B73(可能性分别为0.617、0.201和0.300)，1株简达气单胞菌B21(可能性为0.461)和1株兽生气单胞菌B53(可能性为0.740)。3．采用16S rRNA、cpn60、rpoB、gyrB和dnaJ五个基因的序列分析方法对32株致病性气单胞菌进行鉴定。结果显示：32株气单胞菌分为4个种：嗜水气单胞菌21株、维氏气单胞菌7株、豚鼠气单胞菌2株和简达气单胞菌2株。功能基因cpn60和dnaJ对气单胞菌的聚类分析中，其平均遗传距离分别为0.082和0.089，明显高于其余三个基因，可考虑作为鉴定鳗鲡致病性气单胞菌的重要依据。4．以12类（30种）抗生素药物研究32株致病性气单胞菌对药物的敏感性。实验结果表明，庆大霉素、阿米卡星、头孢他啶、头孢噻肟、卡那霉素、洛美沙星、呋喃妥因、哌拉西林、左氧氟沙星、壮观霉素、链霉素、阿奇霉素、氟哌酸、头孢曲松、强力霉素、头孢呋辛等19种药物对大部分致病性气单胞菌敏感；而新生霉素、头孢克罗、头孢拉定、头孢唑林、头孢噻吩、利福平、复方新诺明、氨苄西林、乙酰螺旋霉素、羧苄青霉素、青霉素等11种药物对大部分菌株表现为耐药。5．本研究采用Biolog自动微生物鉴定系统和基因序列分析方法对32株分离于养殖患病鳗鲡的致病性气单胞菌进行鉴定。实验结果显示这两种方法具有较高的一致性，32株气单胞菌包括嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌和简达气单胞菌。其中，嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌是养殖鳗鲡的主要致病菌之一，并且首次从养殖患病鳗鲡体内分离得到致病性简达气单胞菌。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-11
第1章绪论  11-26
  1.1 养殖鱼类主要疾病的研究现状  11-17
    1.1.1 细菌性疾病  11-14
    1.1.2 寄生虫性疾病  14-15
    1.1.3 病毒性疾病  15
    1.1.4 真菌及其他类疾病  15-17
  1.2 养殖鳗鲡细菌性疾病的研究现状  17-20
    1.2.1 养殖鳗鲡主要细菌性疾病的研究现状  17-18
    1.2.2 养殖鱼类气单胞菌病的研究现状  18-20
  1.3 鱼类细菌性疾病检测技术的研究现状  20-24
    1.3.1 生理生化鉴定技术  20-21
    1.3.2 免疫学诊断技术  21-22
    1.3.3 分子生物学鉴定技术  22-24
  1.4 本研究的背景、意义和内容  24-26
    1.4.1 研究背景  24-25
    1.4.2 研究意义  25
    1.4.3 研究内容  25-26
第2章养殖鳗鲡病原菌的分离、初步鉴定及攻毒感染试验  26-35
  2.1 材料与方法  26-27
    2.1.1 材料  26
    2.1.2 病原菌的分离  26-27
    2.1.3 分离菌的初步生化鉴定  27
    2.1.4 分离菌的电镜观察  27
    2.1.5 攻毒感染试验  27
  2.2 结果  27-33
    2.2.1 细菌的分离结果  27-28
    2.2.2 分离菌株的革兰氏染色和电镜观察结果  28
    2.2.3 分离菌株的生化鉴定结果  28-31
    2.2.4 攻毒试验结果  31-33
  2.3 讨论  33-35
    2.3.1 鱼类不同脏器中致病性气单胞菌的分布  33
    2.3.2 细菌的分离和鉴定方法  33-34
    2.3.3 分离菌株的攻毒试验  34-35
第3章养殖鳗鲡致病性气单胞菌的 BIOLOG 系统鉴定  35-46
  3.1 材料与方法  36-38
    3.1.1 试验菌株  36-37
    3.1.2 试验试剂  37
    3.1.3 主要器材  37
    3.1.4 实验方法  37-38
  3.2 结果  38-43
  3.3 讨论  43-46
    3.3.1 Biolog 鉴定系统应用于微生物检测的研究  43
    3.3.2 致病性气单胞菌的 Biolog 鉴定指标分析  43-44
    3.3.3 气单胞菌对水产动物的致病性  44-46
第4章养殖鳗鲡致病性气单胞菌的分子生物学鉴定  46-61
  4.1 材料与方法  46-49
    4.1.1 试验菌株  46
    4.1.2 主要试剂  46
    4.1.3 实验方法  46-49
  4.2 结果  49-59
    4.2.1 基因序列 PCR 扩增后电泳检测  49
    4.2.2 基因序列比对与系统发育树构建  49-51
    4.2.3 细菌不同基因的多样性与遗传距离  51-58
    4.2.4 分离菌的基因序列分析鉴定与 Biolog 系统鉴定结果比较  58-59
  4.3 讨论  59-61
    4.3.1 基因序列分析作为细菌鉴定依据的可行性分析  59-60
    4.3.2 不同功能基因应用于气单胞菌属菌株的鉴定  60-61
第5章养殖鳗鲡致病性气单胞菌的药物敏感性试验  61-68
  5.1 材料与方法  61-62
    5.1.1 试验菌株  61
    5.1.2 试验试剂  61
    5.1.3 实验方法  61-62
  5.2 结果  62-66
    5.2.1 致病性气单胞菌对药物的敏感性  62-64
    5.2.2 不同气单胞菌对药物的敏感性差异  64-66
  5.3 讨论  66-68
    5.3.1 药敏试验结果的判断标准及其影响因素  66
    5.3.2 气单胞菌的药敏试验研究  66-67
    5.3.3 药敏试验应用于细菌的分类鉴定研究  67-68
第6章总结与展望  68-70
  6.1 主要成果与创新之处  68-69
    6.1.1 主要成果  68
    6.1.2 创新之处  68-69
  6.2 展望  69-70
致谢  70-71
参考文献  71-79
附录  79-80
在学期间发表或撰写的学术论文  80

养殖鳗鲡致病性气单胞菌的分离与鉴定

内容摘要

全文目录

相似论文