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中华大蟾蜍视网膜超微结构和视神经再生过程中视网膜结构及GFAP的变化

作　者: 赵留涛
导　师: 刘忠虎; 张书松
学　校: 河南农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 中华大蟾蜍视网膜 GFAP 免疫组织化学视神经损伤再生
分类号: S865.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

本文以中华大蟾蜍(Bufo gargarizans Cantor)的视觉系统为研究对象，详细观察和描述了中华大蟾蜍正常视网膜的结构和损伤后视神经后不同时期视网膜的结构，分别对正常视网膜和损伤视神经后不同时期视网膜的各层厚度和总厚度进行了测量、比较和统计学处理。同时通过免疫组织化学方法研究了在中华大蟾蜍视神经再生过程中GFAP在视网膜的表达变化。结果发现：(1)中华大蟾蜍的视网膜和大多数脊椎动物的基本一样，具有色素层、视锥视杆层、外界膜、外核层、外网层、内核层、内网层、节细胞层、神经纤维层、内界膜等十层结构。其中视细胞与节细胞数量之比为3.01:1结果表明，视网膜结构特点和昼行动物的视网膜结构相似；但实际上它主要是白昼潜伏，晚上或雨天等弱光环境中活动。(2)在电镜下观察中华大蟾蜍正常视网膜的结构如下：透射电镜下观察到色素上皮细胞内有一个球形的吞噬体，在细胞核周围还分布有大量的黑色素颗粒、内质网、脂肪滴等亚显微结构。感光细胞的外突和内突能明显观察到，其中外突又分为内节和外节，外节中能观察到大量密集平行堆叠的膜盘；靠近外节处有椭球体，椭球体内含有大量的线粒体；椭球体与内核层之间存在着肌样体，肌样体内含有高尔基体、内质网、核糖体等。内核层中观察到深颜色的Müller细胞核；节细胞层观察到单层排列的细胞核；神经纤维层能看到柱状排列的纤维束。扫描电镜下能清晰观察到各层的结构分界；其中感光细胞有两种，锥形和杆形，并且视杆细胞的外、内节表面有纵行的小叶间沟。(3)通过对不同损伤时期视网膜和正常视网膜的比较中得出：随着损伤时间的推进，视网膜各层的厚度先降低，再升高然后有所降低，在损伤后30d基本上恢复正常的视网膜厚度。其中，色素层、外核层和内核层增厚的最大值出现在损伤后第7d；视锥视杆层、外网层、内网层、节细胞层和神经纤维层的增厚最大值都出现在损伤后第14d。(4)利用免疫组织化学方法检测GFAP结果显示：中华大蟾蜍正常视网膜Müller细胞所在的内、外界膜之间观察到有细丝状GFAP阳性着色。在不同损伤时期视网膜与正常视网膜中的Müller细胞的个数比较中得出，先升高后降低，最后趋于正常。在损伤后3d达到顶峰，损伤后90d视网膜中Müller细胞个数等于正常视网膜中Müller细胞个数。

全文目录

致谢  4-7
摘要  7-8
前言  8
1 文献综述  8-17
  1.1 视网膜顶盖系统  8-12
    1.1.1 视网膜  10-11
    1.1.2 视神经  11-12
    1.1.3 视顶盖  12
  1.2 视神经发育、损伤和再生  12-16
    1.2.1 视神经发育  12
    1.2.2 视神经损伤  12-13
    1.2.3 视神经再生  13-16
  1.3 视网膜的再生  16-17
2 本文的研究内容和方法  17-18
3 材料与方法  18-22
  3.1 材料  18-20
    3.1.1 试验动物  18
    3.1.2 试验仪器  18
    3.1.3 试验用试剂  18-19
    3.1.4 溶液的配制方法  19-20
  3.2 方法  20-22
    3.2.1 损伤视神经  20-21
    3.2.2 取材  21
    3.2.3 视网膜各层厚度的测量  21
    3.2.4 免疫组化染色  21
    3.2.5 透射电镜观察样品制作  21-22
    3.2.6 扫描电镜观察样品制作  22
4 结果与分析  22-49
  4.1 大体解剖  22-23
    4.1.1 视网膜——顶盖系统  22-23
    4.1.2 顶盖在中华大蟾蜍脑中的位置  23
  4.2 正常视网膜的各层情况  23-25
    4.2.1 色素上皮层(RPE)  24
    4.2.2 视杆视锥层(RCL)  24
    4.2.3 外界膜（OLM）  24
    4.2.4 外核层(ONL)  24
    4.2.5 外网层(OPL)  24
    4.2.6 内核层(INL)  24
    4.2.7 内网层(IPL)  24-25
    4.2.8 神经节细胞层(GCL)  25
    4.2.9 神经纤维层(NFL)  25
    4.2.10 内界膜(ILM)  25
  4.3 视网膜中各个核层细胞数比值  25-26
  4.4 正常顶盖的结构  26-27
  4.5 视神经光镜下观察  27-28
  4.6 视神经损伤后不同时期的视网膜形态学光镜观察  28-30
  4.7 视神经损伤后不同时期视网膜的各层厚度  30-37
    4.7.1 视网膜总厚度不同时期的比较  30-31
    4.7.2 视网膜色素层不同时期的比较  31-32
    4.7.3 视网膜视锥视杆层不同时期的比较  32
    4.7.4 视网膜外核层不同时期的比较  32-33
    4.7.5 视网膜外网层不同时期的比较  33-34
    4.7.6 视网膜内核层不同时期的比较  34
    4.7.7 视网膜内网层不同时期的比较  34-35
    4.7.8 视网膜神经节细胞层不同时期的比较  35-36
    4.7.9 视网膜神经纤维层不同时期的比较  36
    4.7.10 正常和损伤不同时期的视网膜各层厚度比较的统计学上意义  36-37
  4.8 损伤不同时期视网膜各层的 GFAP 表达  37-40
    4.8.1 在正常的视网膜 GFAP 的分布  37-38
    4.8.2 损伤不同时期 Müller 细胞阳性分布观察  38-39
    4.8.3 不同时期，每个视野下 Müller 细胞个数  39
    4.8.4 不同损伤时期视网膜和正常视网膜中的 Müller 细胞个数比较  39-40
    4.8.5 不同损伤时期视网膜和正常视网膜中的 Müller 细胞个数比较的统计学意义  40
  4.9 视网膜透射电镜结构  40-46
  4.10 扫描电镜下正常视网膜的形态观察  46-49
5 讨论  49-52
  5.1 中华大蟾蜍的视网膜结构特点  49-50
  5.2 损伤视神经对视网膜结构的影响  50-51
  5.3 在视神经再生过程中 GFAP 在视网膜中的表达  51-52
6 结论  52-54
参考文献  54-60
Abstract  60-61

中华大蟾蜍视网膜超微结构和视神经再生过程中视网膜结构及GFAP的变化

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