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苦豆籽粕—两歧双歧杆菌—唾液乳杆菌合生元微胶囊的研制

作　者: 倪敬轩
导　师: 杨英
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 苦豆籽粕 两歧双歧杆菌 猪源唾液乳杆菌 合生元微胶囊 仔猪早期断奶
分类号: S859.79
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


为了研发安全、高效、绿色的合生元用于仔猪早期断奶应激综合征的防控,本试验以抑制仔猪致病性大肠杆菌效果优异的猪源唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、两歧双歧杆菌(Bifidobac terium bifidum)为益生菌和苦豆籽粕为益生素,通过海藻酸钠-壳聚糖包被技术将其制成合生元微胶囊进行了一系列探讨。试验以下步骤进行：1.抑制仔猪致病性大肠杆菌效果优异菌株的分离。采集不同日龄的健康仔猪新鲜粪便,经过分离、纯化和牛津杯法筛选得到抑制仔猪致病性大肠杆菌效果优异的菌株。2.筛选菌株特性研究。分离菌株利用生化鉴定和16S rDNA序列同源性分析进行菌株鉴定,然后进行生物学特性试验研究,最后与文献中报道的抑制致病性大肠杆菌优良的一株猪直肠分离的嗜酸乳杆菌标准菌株进行抑菌对比。3.合生元微胶囊配方的确立。通过试验寻找合生元微胶囊制作的益生菌、益生素比例及保护剂、氯化钙、壁材浓度。4.合生元的制作。采用3种制作工艺制备苦豆籽粕-两歧双歧杆菌-唾液乳杆菌合生元微胶囊,并进行贮存稳定性等内容的比较研究。结果显示：1.在TPY和MRS培养基厌氧条件下从健康仔猪新鲜粪便中分离得到了35株疑似乳酸菌,在此基础上利用牛津杯法从中又筛选出抑菌效果最好的11#和14#菌株。2.11“和14#菌株,经生化鉴定和分子生物学鉴定,符合唾液乳杆菌的特性。综合牛津杯法和生物学特性试验,最终选择14“菌株用于制备合生元。14#菌株抑菌效果远远强于文献中报道的抑制致病性大肠杆菌优良的一株猪直肠分离的嗜酸乳杆菌标准菌株。3.通过对几种常用微胶囊化方法筛选表明,挤压法包被两歧双歧杆菌和唾液乳杆菌效果较好。其最佳配方为：菌(唾液乳杆菌与两歧双歧杆菌的活菌比例为10：1)胶比为2：1；4%脱脂乳、1%L-谷氨酸钠溶液、2%海藻酸钠、0.5%壳聚糖、2.5%CaCl2和6%苦豆籽粕。4.工艺1和工艺3制备的产品活菌数分别达到1.1×109Cfu/g和2.0×108Cfu/g人工胃液和人工肠液处理后的活菌数分别为2.5×108Cfu/g和4.3×107Cfu/g,常温保存90d后活菌数分别为3.7×107Cfu/g和1.6×108/g。由此可见,工艺1和工艺3制备的苦豆籽粕-两歧双歧杆菌-唾液乳杆菌合生元微胶囊活菌数高,便于常温贮存,保质期长,而且具有耐胃酸性、肠溶胃不溶的特性。结论：1.从健康仔猪新鲜粪便中分离得到抑制致病性大肠杆菌效果最好的11#和14#菌株,经试验鉴定均为唾液乳杆菌。2.采用挤压法制备的合生元微胶囊的最佳配方为：菌(唾液乳杆菌与两歧双歧杆菌的活菌比例为10：1)胶比为2：1：4%脱脂乳、1%L-谷氨酸钠溶液、2%海藻酸钠、0.5%壳聚糖、2.5%CaCl2和6%苦豆籽粕。3.工艺1和工艺3制备的苦豆籽粕-两歧双歧杆菌-唾液乳杆菌合生元微胶囊生产工艺简捷,性能稳定,在工业化生产,商品运输、贮藏和临床应用等诸多方面具备一定的优势。

全文目录


摘要  3-5
Abstract  5-10
1 引言  10-18
  1.1 合生元的组成  11-14
    1.1.1 益生菌  11-12
    1.1.2 益生素  12-14
      1.1.2.1 苦豆子概述  13-14
      1.1.2.2 苦豆籽粕研究进展  14
  1.2 合生元的作用机制  14-15
    1.2.1 益生菌补充生理性活菌  15
    1.2.2 益生素促进有益菌的增殖  15
    1.2.3 益生素增强有益菌的竞争优势  15
    1.2.4 益生菌和益生素发挥协同作用  15
  1.3 合生元的剂型研究  15-17
    1.3.1 合生元微胶囊技术优势  15-16
    1.3.2 合生元微胶囊制备方法  16
    1.3.3 海藻酸钠-壳聚糖微胶囊技术优势  16-17
  1.4 合生元的生理功能及在临床生产实践中的应用  17-18
    1.4.1 合生元的生理功能  17-18
    1.4.2 合生元在临床生产实践中的应用  18
2 猪源抑制致病性大肠杆菌乳酸菌的分离、纯化、筛选和鉴定  18-32
  2.1 材料与方法  18-24
    2.1.1 材料  18-19
    2.1.2 方法  19-24
  2.2 结果与分析  24-31
    2.2.1 分离筛选菌株形态特征  24-25
    2.2.2 牛津杯法筛选结果  25-27
    2.2.3 生化鉴定  27-28
      2.2.3.1 乳酸菌属的鉴定  27
      2.2.3.2 乳酸菌种的鉴定  27-28
    2.2.4 分子生物学鉴定  28-30
    2.2.5 乳酸菌生长曲线及产酸性能的测定  30-31
    2.2.6 14~＃菌株与嗜酸乳杆菌标准菌株抑菌活性对比  31
  2.3 讨论  31-32
    2.3.1 乳酸菌的分离与纯化  31-32
    2.3.2 乳酸菌的筛选与鉴定  32
3 苦豆籽粕-两歧双歧杆菌-唾液乳杆菌合生元微胶囊的研制  32-43
  3.1 材料与方法  33-35
    3.1.1 材料  33
    3.1.2 方法  33-35
  3.2 结果与分析  35-40
    3.2.1 唾液乳杆菌和两歧双歧杆菌的生长曲线及产酸性能的测定  35-37
    3.2.2 合生元微胶囊中苦豆籽粕最适配比的确立  37
    3.2.3 合生元微胶囊外观形态和粒径大小  37-38
    3.2.4 合生元微胶囊活菌数检验  38-39
    3.2.5 合生元微胶囊肠溶胃不溶特性的测定  39-40
  3.3 讨论  40-43
    3.3.1 合生元微胶囊的益生菌和益生素  41
    3.3.2 合生元微胶囊的壁材  41-42
    3.3.3 3种制备工艺合生元微胶囊的产品性能  42-43
4 结论  43-44
致谢  44-45
参考文献  45-50
作者简介  50

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医药物学 > 兽用药品
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